Количествена норма на HBV ДНК. Интерпретация на PCR и биохимичен анализ за хепатит. Имунологични диагностични методи

Хепатитът е възпалителна чернодробна патология, която се появява поради проникването на вируси в органа или действието на отрови и токсини, което води до разрушаване на хепатоцитите (функционални клетки на органа). В лека форма болестта се лекува сама. В сложни случаи това води до сериозни усложнения: фиброза, цироза или онкология. Идентифицирани са пет вида вирусен хепатит: A, B, C, D и E. Възможно е да се определи дали даден човек има заболяването и под каква форма въз основа на резултатите от специални изследвания.

Причинителите на хепатита са хепатотропни вируси. Те проникват в чернодробните клетки, интегрират се в техния геном, нарушават структурата и водят до тъканна некроза. Те рядко се вкореняват в други органи. Вирусите не разрушават чернодробната клетка, а я използват за възпроизвеждане.

Човешката имунна система интензивно се бори с вирусите, опитвайки се да ги отслаби и да спре възпроизвеждането им. Но колкото по-силна е борбата, толкова повече хепатоцити умират. Това води до развитие на възпаление (хепатит) и дисфункция на черния дроб.

При добър имунитет черният дроб може самостоятелно да се отърве от вируса и да победи болестта. Това се случва при заболявания от типове A, E и B. Ако имунната система загуби битката, хепатитът става хроничен (особено при вирусни типове C, D и по-рядко B).

Има пет вида заболяване:

1. Хепатит А (причинен от HAV). Пътят на предаване е фекално-орален. Нечистотата, неизмитата храна и мръсната вода са причинители на заразата. Понякога се предава по време на интимност. Често има лека форма и води до пълно възстановяване с последващо формиране на имунитет. Редките тежки видове са фатални. Извършва се ваксинация.
2. Хепатит B (HBV). Той навлиза в тялото чрез течен биологичен материал (кръв, семенна течност) и в детето по време на раждането. При използване на използвана спринцовка при инжектиране на наркотици (наркоманите са изложени на риск). Чрез нестерилни инструменти за многократна употреба в болнични условия (поради небрежност на персонала). Чрез вливане на донорска кръв без предварително изследване. Има ваксина.
3. Хепатит С (HCV). Те се заразяват, както при хепатит В. Все още няма ваксина.
4. Хепатит D (HDV) засяга само тези, заразени с HBV. Поради двойната атака на черния дроб, тежестта на заболяването се увеличава. Ваксинацията срещу В предпазва и от HDV.

Ако вирусният хепатит протича дълго и тайно, това води до опасни и необратими последици. Познаването на този факт е стимул да не пропуснете заболяването и да вземете навременни мерки.

Хепатит B е възпалителна патология на черния дроб, която се появява поради проникването в органа на вируса B. Заболяването е опасно с риск от цироза на черния дроб или онкология на органа.

Пътища на навлизане на болестта:

• използване на използвана спринцовка за инжекции;
• чрез нестерилни и многократно използвани инструменти в лечебни заведения (поради небрежност на персонала);
• използване на донорска кръв без предварително изследване;
• практикуване на незащитен сексуален контакт;
• вертикално предаване от майка, страдаща от заболяване, на нейното дете.

Познаването на признаците на заболяването ще ви помогне да разпознаете болестта навреме и да започнете лечението:

1. Пристъпи на гадене и желание за повръщане.
2. Загуба на апетит.
3. Усещане за дискомфорт под ребрата вдясно.
4. Болка в ставите.
5. Аномалии в честотата и консистенцията на движенията на червата (безцветни изпражнения, тъмна урина).
6. Появата на жълтеникав цвят на кожата.
7. Летаргия и бърза умора.

Днес няма лекарства, които напълно да изхвърлят вируса от тялото и да лекуват напълно. Но ако ввреме за предприемане на терапевтични мерки, осигурете безопасността на печкатайени и е възможно.

ДНК на вируса на хепатит В може да бъде открита чрез PCR (полимеразна верижна реакция). Подозирайте заболяването - в клиниката, като използвате лабораторни и инструментални методи. Първоначално патологията е латентна (инкубационен период), след което преминава в етап на обостряне.

С времето се превръща в хронично заболяване, но това се влияе от броя на вирусите и качеството на терапията. Много е важно да се предотврати последния етап.

Има висококачествен ензимен имуноанализ, който изследва наличието на вирусна ДНК. Но той не е напълно обективен. Когато се извършва, не се открива наличието на патогенен патоген вътре в органите.

Помага да се идентифицират:

• Как имунната система реагира на инфекция?
• има ли антигени и антитела в кръвта.

Следователно терапията за наблюдение е сложна. Въз основа на този метод е невъзможно да се докаже, че човек се е възстановил. Открийте и идентифицирайте ДНК на вируса на хепатит В, която не е потвърдена чрез качествен анализ, като използвате количествен анализ.

Този анализ е надежден и се предписва в следните случаи:

1. Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (ELISA) за антитела е положителен.
2. Установено е наличието на вирусна чернодробна патология.
3. Има вероятност от няколко вида хепатит.

Ако заболяването е леко и без усложнения, не е необходимо да се определя вирусното натоварване. Пациентът се лекува въз основа на показанията на ELISA.

Медицинската наука е разработила метода на полимеразна верижна реакция (PCR), с помощта на който се определя както наличието на вирусна ДНК, така и нейното количество в кръвта.

За откриване на ДНК на вируса на хепатит В се извършва PCR, за да се преброи броят на HBV частиците на единица обем кръвен серум. Нивото на хепатитния вирус се счита за нормално при липса на двойна ДНК инфекция.

T Какъв вид диагностика има за цел:

1. Изчислете броя на вирусните частици на единица обем серум.
2. Потвърдете остър хепатит.
3. Своевременно предотвратявайте хронифицирането на болестта.
4. Идентифицирайте вирусоносителите с положителни резултати от ELISA.
5. Следете връщането на вирусите след лечението.
6. Вземете правилното решение за предписване на терапия, комбиниране или спиране.

След преминаване на инкубационния период остър хепатит дава положителен PCR резултат след седем до четиринадесет дни.

Преди да предпише кръв за анализ, лекарят пита медицинската история на пациента:

• дали лекарствата са инжектирани във вена;
• дали чужда кръв е прелята или дарена като донор;
• дали е имало операции;
• дали има кожни лезии;
• дали е имало съмнителни сексуални отношения;
• дали е имало контакти с хора, заразени с хепатит В.

Кръв за анализ се взема от вената на гладно сутрин между 7 и 9 часа, за да са надеждни резултатите.

Подгответе се за вземане на кръв, като следвате правилата:

• не яжте мазни храни в продължение на 12 часа, не пийте алкохолни напитки, не пушете;
• избягвайте физически и спортни дейности;
• уведомете лабораторията, ако сте приемали лекарства (по възможност избягвайте приема им);
• Деца под пет години трябва да пият двеста грама преварена вода на интервали от десет минути половин час преди вземане на кръв.

Концентрацията на HBV ДНК се измерва в копия/ml или me/ml.

При оценката на резултатите от изследването се ръководим от следните показатели:

• < 2х10, что означает при расшифровке, что острая стадия не станет хронической;
• от 2x10^4 до 2x10^6 – в тридесет процента от случаите ще стане хроничен;
• >2x10^6 – в деветдесет и пет процента от случаите ще стане хроничен.

Количественият PCR е основният метод за диагностициране на екзацербации на хепатит B и идентифициране на латентен носител на инфекцията с висока HBV виремия.

Извършва се PCR тест за хепатит за откриване на инфекция (HBV ДНК). Този вид диагностично откриване на вредни микроорганизми идва на помощ не само при хепатит В. За да се открият секретни и трудни за откриване патогени в органите, PCR често се използва за потвърждаване или отхвърляне на инфекция в гинекологичната и урологичната практика.

Изследвайки кръвта, те установяват:

• хепатит А, В, С, D и ТТ;
• HIV инфекция;
• чернодробни патологии;
• херпес от всички видове;
• цитомегаловируси;
• ентеровирусна инфекция;
• токсоплазмоза;
• рубеола;
• други заболявания, причинени от вируси.

Този метод е подходящ не само за диагностициране на заболявания с помощта на кръвен серум. За анализ се вземат и други биоматериали. Това е слюнка, генитални тампони, еякулат.

Следователно списъкът на заболяванията, за които е показана PCR диагностика, се разширява:

1. Туберкулоза.
2. Салмонелоза.
3. дифтерия.
4. Венерически болести.
5. Вирусни папиломи

PCR е един от задължителните тестове за жена, която носи дете. За да се предотврати патологичен ход на бременността и отклонения в развитието на бебето, е необходимо да се изключи възможността майката да се зарази с опасни заболявания.

Времева рамка за количествен анализ на ДНК на вируса на хепатит В

PCR без грешки с висока точност открива наличието на вируса на ранен етап. При тестване с помощта на ELISA антигенът се появява само два месеца след заразяването. С PCR - след тридесет дни. Открива се не само обикновеният вирус, но и мутирали щамове, които никой друг анализ не може да открие.

Има стандартни числа за количествено определяне на вируса. Стойностите, получени по време на изследването, се сравняват с тях и се правят заключения за степента на развитие на заболяването или неговото отсъствие. Данните от PCR анализ се издават след две седмици.

Често хората не знаят, че са имали хепатит B. Бъркат го с настинка или грип. Поради заболяването се увеличава рискът от получаване на сериозни чернодробни усложнения по време на живота. Ето защо е по-добре да играете на сигурно и да се свържете с специалист по инфекциозни заболявания.

Пациентът, след като получи резултатите от теста, се опитва да направи изводи за наличието на хепатит и да определи етапа на развитие на заболяването. В този случай често се допуска грешка при оценката на реалното състояние на нещата. За да избегнат това, те идват при лекарите за съвет.

Медицински специалисти в тази област:

1. вирусолог.
2. Хепатолог.
3. Специалист по инфекциозни болести.

Анализът на количествения PCR тест се дешифрира от лекуващия лекар и въз основа на резултата се оценява естеството на хода на хепатит В и индикациите за по-нататъшна диагностика.

Помага да изберете необходимото лечение или да го отмените, ако пациентът няма заболяване.

След дешифриране лекарят по инфекциозни заболявания ще оцени обективно здравословното състояние на пациента, ще предпише правилното лечение и ще даде съвет.

За да се избегнат проблеми, свързани с това заболяване, хепатолозите силно препоръчват ваксинация срещу хепатит В. Въвеждането на ваксината дава абсолютна гаранция, че човек ще бъде защитен от болестта.

Ваксината се прилага:

• всички бебета веднага след раждането;
• служители на лечебни заведения;
• тези, които получават вливане на чужда кръв.

Колко дълго ще действа поставената ваксина зависи от имунитета на всеки човек поотделно (от 10 до 20 години). Ако е необходимо, ваксинацията се повтаря.

Полимеразната верижна реакция е вид кръвен тест, който ви позволява точно да откриете вируса на хепатит В. Особеност на метода е, че той е в състояние да покаже HBV в ранните етапи - в рамките на един месец след инфекцията, докато специфичен антиген в пациент се открива едва след 2 месеца. PCR може да открие не само обикновен ДНК вирус, но и мутантни щамове, които никой друг анализ не може да открие.

При дешифриране на PCR за хепатит В резултатите се сравняват със стандартните стойности. Въз основа на това се правят заключения за наличието на заболяване (положителен резултат), концентрацията на вируса (активност) или липсата на заболяване (отрицателен резултат). Обработката на данните отнема 2 седмици.

Има 2 вида диагностика, които се предписват за хепатит В. Качествената PCR позволява да се каже със 100% точност дали HBV е в кръвта или не. Количественият PCR показва активността на вируса, тоест колко HBV ДНК фрагмента се съдържат в 1 ml кръв.

Качествена PCR и нейната интерпретация

Кръвен тест за хепатит В с помощта на метода PCR може да разкрие само наличието на ДНК фрагменти. Предписва се, когато пациентът подозира инфекция с HBV или когато други диагностични методи, като серологични тестове, не дават ясен отговор. Декодирането на резултатите при извършване на качествен анализ е много просто:

• отрицателен резултат - няма вирус;
• положителен резултат - вирусът е открит.

Целта на висококачествената PCR е да потвърди или опровергае наличието на вируса на хепатит В, както и да проведе ранна диагностика. Ако HBV се открие в рамките на 1-2 седмици след инфекцията, тогава лечението ще бъде най-ефективно. При активно развитие на HBV в продължение на 2 месеца или повече, заболяването става хронично и не може да бъде напълно излекувано.

В случай, че качествената PCR за хепатит показва наличието на вируса, следващата стъпка е количествената диагноза.

Количествен PCR

За да се предпише ефективно лечение или да се оценят резултатите от терапията, не е достатъчно просто да се знае, че пациентът има HBV. Необходимо е да се определи количествено стойността на ДНК на вируса на хепатит В в 1 ml кръв, т.е. вирусното натоварване на тялото. Този тип PCR за хепатит В се извършва в следните случаи:

1. Преди да предпише лечение.
2. За оценка на ефективността на терапията.
3. За да се определи развитието на резистентност на вируса към взетите лекарства.
4. За определяне на етапа, в който се намира заболяването.

Единицата за измерване на вируса е международните единици (IU/ml) или броят на ДНК копията/ml, т.е. броят на ДНК фрагментите на 1 ml кръв. Съотношението между двете единици зависи от избраната тест система и варира от 2 до 7 копия/ml в 1 IU/ml. Ако системата е неизвестна, тогава средната стойност се използва за преизчисляване:

1 IU/ml = 5 копия/ml

Ако незабавно се направи количествен анализ, тогава граничната норма за диагностициране на заболяването е 75 IU / ml. Ако резултатът е по-висок от този показател, се поставя диагноза HBV, ако резултатът е по-нисък, HBV не се открива.

Интерпретация на количествена PCR

За хепатит B PCR стандартите са следните стойности на вирусен товар (виремия), копия/ml:

• < 10^3 - нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
• от 10^4 до 10^5 - натоварването е ниско, вирусът обикновено е неактивен;
• 10^6 - натоварването е умерено, вирусът е активен;
• 10^7 - висока виремия, вирусът е силно активен.

Познавайки количествено как се държи вирусът в тялото, можете да определите формата на заболяването (хронична, остра или носителство), необходимостта от допълнителни изследвания, реакцията на тялото и вируса към лечението:

1. Хроничен хепатит B се диагностицира, ако стойността на трансаминазите е по-висока от нормалната, активността на вируса е повече от 4 и концентрацията на ДНК копия на милилитър кръв е 10^5 копия.
2. Носенето се определя от следната картина, която дават резултатите - концентрация< 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
3. HBV резистентността се следи постоянно по време на лечението. Тестовете се правят на всеки 3 месеца. Ако в даден момент виремията при хепатит се увеличи 10 пъти, това означава, че HBV се е адаптирал към използваните лекарства – станал е резистентен.
4. Благоприятният курс на лечение ще покаже намаляване на виремията с 85% 3 дни след началото на терапията.
5. Пациентът получава направление за чернодробна биопсия само когато нивото на ALT (аланин аминотрансфераза) превишава нормалната стойност не повече от 2 пъти за 6 месеца, а PCR за хепатит B показва виремия > 10^5 копия/ml. Когато при висока вирусна активност се наблюдава повишаване на нивата на ALT повече от 2 пъти за шест месеца, тогава незабавно се предписва антивирусна терапия.

За да разберете как ще се държи ДНК хепатитът по отношение на хроничността, т.е. преходът към хронична форма от остра форма, се използват и резултатите от PCR диагностиката:

• HBV ДНК< 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
• HBV ДНК варира от 2 x 10^4 до 2 x 10^6 копия/ml, което означава, че всеки 4-ти пациент ще има хроничен HBV, тоест хронифицирането е 25-30%;
• HBV ДНК > 2 x 10^6 копия/ml означава, че придобиването на хронична форма на заболяването е неизбежно.

Подготовка за изпита

За да се определи наличието на HBV с помощта на PCR, се извършва кръвен тест от вена. Процедурата винаги се извършва строго на празен стомах и най-добре е да стигнете до лабораторията сутрин, когато естественото време за почивка от храната е 8 часа. За да бъдат резултатите от прегледа правилни, трябва предварително да знаете как да се подготвите правилно за посещение в клиниката. Допълнителните стъпки са:

1. Избягвайте мазни храни, тютюнопушене, алкохол и спорт 12 часа преди процедурата.
2. Почивайте 20 минути непосредствено преди кръводаряване.
3. Преди да започнете процедурата, трябва да информирате медицинската сестра за лекарствата, които приемате.

внимание! Ако диагнозата се извършва на дете под 5-годишна възраст, тогава половин час преди процедурата трябва да му се дава 1 чаша преварена вода на всеки 10 минути.

Обобщаване

Днес PCR диагностиката за откриване на хепатит В е най-точният метод. Методът ви позволява да видите скрити и мутирали форми на заболяването, да идентифицирате заболяването през първите седмици след инфекцията и съответно да проведете ефективно лечение. В зависимост от ситуацията се извършва качествена или количествена PCR, която е насочена към идентифициране на HBV и установяване на неговата активност. За да се подложите на преглед, трябва да се свържете с вирусолог, специалист по инфекциозни заболявания или хепатолог.

Хепатит B е вирусна инфекция, която засяга черния дроб. Днес около 300 милиона души по света са носители на хепатит В.

При някои вирусът прогресира до цироза на черния дроб или хепатоцелуларен карцином (първият стадий на рак). Новите стратегии за изследване на антивирусните заболявания имат две цели:

• определи колко чувствителен е тялото към вирусния товар;
• да се определи колко устойчив е вирусът на лекарства и други медицински интервенции.

Характеристики на тестове за хепатит

Серологичните тестове са насочени към идентифициране на антигени и антитела в кръвния серум, но този метод е ненадежден. Затова учените разработиха метода на полимеразна верижна реакция (PCR). Тя ви позволява не само да определите качествено наличието на вируса (има ли или не), но и количествено (колко антитела присъстват в кръвния серум).

Преди да вземе кръв, лекарят трябва да разбере:

При остър хепатит положителен резултат може да се установи 1-2 седмици след инкубацията чрез PCR.

Кръвни тестове за откриване на вируса на хепатит B (HBV) се вземат, когато:

Също така редовно се вземат тестове от хора в риск, те включват:

• хора, които се нуждаят от чести кръвопреливания;
• пациенти, подложени на текущи процедури за пречистване на кръвта за бъбречна недостатъчност;
• хора със СПИН или ХИВ инфекция;
• бременни жени;
• здравни работници, изложени на кръв;
• пациенти със симптоми на чернодробно заболяване.
• тези, които се лекуват от цироза, рак и други чернодробни заболявания.

Подготовката за количествен анализ изисква спазване на следните правила:

Ефективната терапия на заболяването засяга намаляването на количеството вирусна ДНК в серума. Шест месеца след началото на лечението количеството на вируса трябва да намалее с 2-3 порядъка. Ако резултатите от теста не са се променили с течение на времето или, напротив, са се влошили, тогава трябва да се промени цялата терапия и острият хепатит автоматично се преименува на хроничен.

Когато ДНК на вируса на хепатит навлезе в тялото, инфекцията може да възникне по 2 начина:

Как се извършва процедурата за вземане на кръв? Лекарят стяга предмишницата на пациента с турникет и вкарва игла във вена на лакътя, след това изтегля кръвта в спринцовка и я излива в специална тръба. Резултатите ще бъдат готови до няколко дни, срокът зависи от мястото, където се изследва пациентът.

Материалът е кръвен серум, лимфоцити, хепатобиопсия, която се поставя в епруветка с добре завинтена капачка. Но резултатът може да бъде повлиян от замърсен материал за вземане на проби, преекспониране на материала (съхранява се до 24 часа при температура не по-висока от +4 ° C).

Методи за количествен анализ

Има няколко метода за количествен анализ, включително PCR, ELISA и биохимия.

PCR (полимеразна верижна реакция).

Това е тест за повърхностния антигенен протеин, който съставлява част от външната обвивка на вируса. След като вирусните частици навлязат в тялото, те започват интензивно възпроизвеждане на повърхността на черния дроб, унищожавайки здравите клетки на органа. В кръвта се освобождават нови молекули.

Въз основа на това се изследва нивото на концентрация на антитела в серума и се определя дали има инфекция с хепатит В или не.

Материалът за изследването се взема на празен стомах. PCR се извършва в машина, наречена циклер.

Алгоритъм за PCR анализ:

Впоследствие тези стъпки се повтарят многократно и за няколко часа се извършват 35-45 цикъла, формират се милиарди копия на желаната проба. Ако има такива копия, техният брой се изчислява на 1 ml материал за анализ.

ELISA

В допълнение към PCR има метод ELISA (ензимно-свързан имуносорбентен анализ). Той определя не само повърхностните антитела, но и тези, разположени вътре и взаимосвързани с предишни антигени, както и тяхното количество.

Друг метод за количествен анализ. Когато вирусът навлезе в тялото от увредени чернодробни клетки, се отделят ензими, ако количеството им е по-високо от нормалното, тогава можем да говорим за инфекция. Освен това трябва да определите вирусния товар (DNA-HBV), да вземете чернодробни тестове (за билирубин с фракции, ALT, AST, алкална фосфатаза, гама-GT). Задължително е посещението на специалист по инфекциозни заболявания, който при необходимост насочва пациента към фиброеластометрия и избира курс на лечение.

Биохимия - количествен анализ

PCR в реално време

При този метод търсенето на копия се извършва след всеки цикъл, а не след 35-45.Методът работи по същия начин като PCR, позволява ви да определите броя на копията в проба за изследване. По този начин времето за анализ се намалява значително, като същевременно се гарантира 100% резултат.

Откриване на ДНК на хепатит В

Установяването на количеството ДНК на хепатит В е много важно, тъй като при ниско ниво прогнозата на заболяването е по-благоприятна, отколкото при по-високо ниво. Концентрацията на HBV ДНК се измерва в копия/ml или me/ml

1 me/ml = 2,83×10 копия/ml

Резултатите от този анализ могат да бъдат както следва:

Ако резултатът от теста е положителен, тогава се диагностицира следното:

• носителство на вируса на хепатит В;
• хронично хепатитно заболяване;
• остро заболяване с хепатит В.

Ако резултатът е отрицателен, тогава:

В редки случаи отрицателният резултат от ДНК теста за вируса на хепатит В показва бърз и злокачествен ход на заболяването.

Решението за изследване за вируса се взема от:

• терапевт;
• вирусолог;
• хематолог;
• специалист по инфекциозни болести

Количественият анализ е задължителен при диагностициране на заболяването и трябва да се извърши преди започване на терапията. Но трябва да се помни, че хепатит В понякога е тясно преплетен с хепатит D, което може да създаде допълнителни трудности при провеждането на такъв анализ. Следователно трябва да се вземат предвид следните усложнения:

• персистиращ хроничен хепатит;
• цироза на черния дроб;

за скрининг и идентифициране на пациенти в риск:

• пациенти с чести кръвопреливания;
• пациенти с хронична бъбречна недостатъчност;
• пациенти с многократна хемодиализа;
• пациенти с имунодефицитни състояния, включително СПИН.

Резултатите от изследването се изразяват качествено - положителни или отрицателни. Отрицателният резултат от теста показва липсата на HBsAg в кръвния серум. Положителен резултат - откриването на HBsAg показва инкубационен или остър период на остър вирусен хепатит B, както и при хроничен вирусен хепатит B.

Антитела към ядрения антиген на вируса на хепатит В JgG (анти-HBcAg JgG)

Обикновено анти-HBcAg JgG отсъства в серума.
При пациентите анти-HBcAg JgG се появява по време на острия период на вирусен хепатит В и продължава през целия живот. Анти-HBcAg JgG – водещ маркер за предишна HBV инфекция.

Кръвните тестове за наличие на анти-HBcAg JgG се използват за диагностициране на:

• хроничен вирусен хепатит В при наличие на HBs антиген в кръвния серум;
• пренесен вирусен хепатит В.

Оценка на резултатите от изследването

Резултатът от изследването се изразява качествено - положителен или отрицателен. Отрицателният резултат от теста показва липсата на анти-HBcAg JgG в кръвния серум. Положителен резултат - откриването на анти-HBcAg JgG показва остра инфекция, реконвалесценция или предишен вирусен хепатит В.

Антиген "е" на вируса на хепатит В (HBeAg)

Обикновено в кръвния серум няма HBeAg.
HBeAg може да бъде открит в кръвния серум на повечето пациенти с остър вирусен хепатит B. Обикновено изчезва в кръвта преди HBs антигена. Високото ниво на HBeAg през първите седмици на заболяването или откриването му за повече от 8 седмици дава основание да се подозира хронична инфекция.

Този антиген често се открива при хроничен активен хепатит с вирусна етиология. Особен интерес при определянето на HBeAg се дължи на факта, че откриването му се характеризира с активна репликативна фаза на инфекциозния процес. Установено е, че високите концентрации на HBeAg съответстват на висока активност на ДНК полимераза и характеризират активната репликация на вируса.

Наличието на HBeAg в кръвта показва неговата висока инфекциозност, т.е. наличието на активна инфекция с хепатит В в тялото на субекта и се открива само ако HBs антигенът присъства в кръвта. При пациенти с хроничен активен хепатит антивирусните лекарства се използват само при откриване на HBeAg в кръвта. HBeAg – антиген – маркер на острата фаза и репликацията на вируса на хепатит В.

Кръвен тест за наличие на HBe антиген се използва за диагностициране на:

• инкубационен период на вирусен хепатит В;
• продромален период на вирусен хепатит В;
• остър период на вирусен хепатит В;
• хроничен персистиращ вирусен хепатит В.

Оценка на резултатите от изследването

Резултатът от изследването се изразява качествено - положителен или отрицателен. Отрицателният резултат от теста показва липсата на HBeAg в кръвния серум. Положителен резултат - откриването на HBeAg показва инкубационен или остър период на остър вирусен хепатит B или продължаваща репликация на вируса и инфекциозност на пациента.

Антитела срещу антиген "e" на вируса на хепатит B (anti-HBeAg)

Анти-HBeAg обикновено отсъства в серума. Появата на анти-HBeAg антитела обикновено показва интензивно елиминиране на вируса на хепатит В от тялото и лека инфекция на пациента.

Тези антитела се появяват по време на острия период и персистират до 5 години след инфекцията. При хроничен персистиращ хепатит заедно с HBsAg в кръвта на пациента се открива анти-HBeAg. Сероконверсия, т.е. преходът на HBeAg към анти-HBeAg при хроничен активен хепатит често е прогностично благоприятен, но същата сероконверсия с тежка циротична трансформация на черния дроб не подобрява прогнозата.

Кръвен тест за наличие на анти-HBeAg се използва в следните случаи при диагностициране на вирусен хепатит В:

• установяване на началния стадий на заболяването;
• остър период на инфекция;
• ранен стадий на реконвалесценция;
• възстановяване;
• късен стадий на реконвалесценция.
• диагностика на скорошен вирусен хепатит В;
• диагноза хроничен персистиращ вирусен хепатит В.

Оценка на резултатите от изследването

Резултатът от изследването се изразява качествено - положителен или отрицателен. Отрицателният резултат от теста показва липсата на антитела срещу HBeAg в кръвния серум. Положителен резултат е откриването на антитела срещу HBeAg, което може да показва началния стадий на остър вирусен хепатит В, острия период на инфекция, ранния стадий на реконвалесценция, реконвалесценция, скорошен вирусен хепатит В или персистиращ вирусен хепатит В.

Критериите за наличие на хроничен хепатит В са:

• откриване или периодично откриване на HBV ДНК в кръвта;
• постоянно или периодично повишаване на активността на ALT/AST в кръвта;\
• морфологични признаци на хроничен хепатит по време на хистологично изследване на чернодробна биопсия.

Откриване на вируса на хепатит В чрез PCR (качествено)

Вирусът на хепатит В обикновено отсъства в кръвта.
Качественото определяне на вируса на хепатит В чрез PCR в кръвта ни позволява да потвърдим наличието на вируса в тялото на пациента и по този начин да установим етиологията на заболяването.

Това изследване предоставя полезна информация за диагностицирането на остър вирусен хепатит В в инкубационния и ранния период на развитие на заболяването, когато основните серологични маркери в кръвта на пациента може да отсъстват. Вирусна ДНК в кръвния серум се открива при 50% от пациентите при липса на HBeAg. Аналитичната чувствителност на PCR метода е най-малко 80 вирусни частици в 5 μl ДНК проба, специфичността е 98%.

Този метод е важен за диагностика и проследяване на хода на хроничния HBV. Приблизително 5-10% от случаите на цироза и други хронични чернодробни заболявания са причинени от хронично носителство на вируса на хепатит В. Маркерите за активността на такива заболявания са наличието на HBeAg и ДНК на вируса на хепатит В в кръвта.

PCR методът ви позволява да определите ДНК на вируса на хепатит В в кръвта както качествено, така и количествено. Идентифицираният фрагмент и в двата случая е уникалната ДНК последователност на гена за структурния протеин на вируса на хепатит В.

Откриването на ДНК на вируса на хепатит В в биоматериал чрез PCR е необходимо за:

• разрешаване на съмнителни резултати от серологични изследвания;
• идентифициране на острия стадий на заболяването в сравнение с предишна инфекция или експозиция;
• наблюдение на ефективността на антивирусното лечение.

Изчезването на ДНК на вируса на хепатит В от кръвта е признак за ефективността на терапията

Откриване на вируса на хепатит В чрез PCR (количествено)

Този метод дава важна информация за интензивността на развитие на заболяването, ефективността на лечението и развитието на резистентност към активните лекарства.
За диагностициране на вирусен хепатит чрез PCR в кръвен серум се използват тестови системи, чиято чувствителност е 50-100 копия на проба, което позволява откриването на вируса при концентрация от 5 X 10 ^ 3 -10 ^ 4 копия / ml. PCR за вирусен хепатит В със сигурност е необходим, за да се прецени репликацията на вируса.

Вирусна ДНК в кръвния серум се открива при 50% от пациентите при липса на HBeAg. Кръвен серум, лимфоцити и проби от хепатобиопсия могат да служат като материали за откриване на ДНК на вируса на хепатит В.

• Нивото на виремия се оценява, както следва:
• по-малко от 2,10^5 копия/ml (по-малко от 2,10^5 IU/ml) – ниска виремия;
• от 2,10^5 копия/ml (2,10^5 IU/ml) до 2,10^6 копия/ml (8,10^5 IU/ml) – средна виремия;
• повече от 2,10^6 копия/ml – висока виремия.

Съществува връзка между изхода от остър вирусен хепатит B и концентрацията на HBV ДНК в кръвта на пациента. При ниско ниво на виремия процесът на хронифициране на инфекцията е близо до нула, при средно ниво хронифицирането на процеса се наблюдава при 25-30% от пациентите, а при високо ниво на виремия - остър вирусен хепатит В най-често става хроничен.

Показания за лечение на хроничен HBV с интерферон-алфа трябва да бъде наличието на маркери за активна вирусна репликация (откриване на HBsAg, HBeAg и HBV ДНК в кръвния серум през предходните 6 месеца).

Критериите за оценка на ефективността на лечението са изчезването на HBeAg и HBV ДНК в кръвта, което обикновено е придружено от нормализиране на нивата на трансаминазите и дългосрочна ремисия на заболяването; HBV ДНК изчезва от кръвта до 5-ия месец от лечението при 60%, до 9-ия месец при 80% от пациентите. Намаляването на нивото на виремия с 85% или повече до третия ден от началото на лечението в сравнение с изходното ниво служи като бърз и сравнително точен критерий за прогнозиране на ефективността на терапията.

Наличието на съвременни лекарства срещу хепатит В (HBV) с ясни показания за тяхното приложение изисква точна и бърза проверка на диагнозата. Въпреки това, поради оскъдните клинични данни през първите седмици на заболяването и ограниченията на методите за имуноензимен анализ, скоростта на диагностика е намалена.

Наличието на маркери anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe ви позволява да потвърдите HBV или да установите факта на предишно заболяване. Но можете да определите наличието на активни вирусни частици в кръвта и да преброите техния брой по време на изследването с помощта на PCR - количествен тест в реално време за откриване на хепатит В. Методът, в сравнение с ензимно-свързаните имуносорбентни диагностични методи, решава диагностични проблеми и ви позволява да предвидите хода на заболяването, докато го приемате антивирусни лекарства.

Диагнозата на хепатит В се основава на оценка на клиничните прояви, ензимен имуноанализ и инструментални методи на изследване. Заболяването протича в остра фаза след инкубационен период и в зависимост от дозата на инфекцията и ефективността на лечението преминава в хроничен стадий. Основната цел на лечението остава предотвратяването на хронифицирането, тоест елиминирането на всички вирусни частици от кръвта. Клиничната норма за протичане на заболяването е излекуване без последваща виремия.

Фактът, че инфекцията е елиминирана, трябва да се докаже чрез количествен метод на изследване.

Тъй като всеки висококачествен ензимен имуноанализ позволява индиректно диагностициране на HBV, тоест не показва наличието на патогена във вътрешната среда на тялото, а характеризира имунния отговор на инфекцията, наблюдавайки ефективността на терапията и факта на излекуване става трудно доказуемо. Следователно пациент с хепатит В или с диагностични критерии в негова полза трябва да се подложи на полимеразна верижна реакция, за да се определи количествено броят на вирусните частици в кръвта. Диагностичната норма е липсата на ДНК копия на инфекцията.

Описание на диагностичния метод

Високочувствителният PCR метод за диагностика на хепатит В попада в категорията на генно инженерните молекулярно-биологични изследвания. Използва се за определяне на количеството вирусна ДНК в биологичния материал на пациента и допустимата граница. Въз основа на получените резултати се определя броят на вирусните частици в единица обем. Материал за диагностично изследване е венозната кръв на пациента. Вземането е за предпочитане на празен стомах поради възможното влияние на хилозния серум върху резултата от теста.

Получените резултати трябва да бъдат предоставени на лекаря за тълкуване и определяне на по-нататъшни тактики. Независимото декодиране няма диагностична стойност.

Значението на резултата от броя на вирусните частици, получени чрез PCR метода, надвишава стойността на ензимните имуноанализи. Тъй като анализът в реално време показва наличието на патогена в кръвта, неговото информационно съдържание е по-високо от другите. Ако ELISA показва само наличието на антитела, което се наблюдава от 4 седмици от инкубационния период и продължава повече от 8 седмици след елиминирането на вируса от кръвта, тогава полимеразната верижна реакция ясно потвърждава активния ход на заболяването или неговото излекуване и характеризира динамиката на предписаната терапия.

Полимеразна верижна реакция с количествено определяне на патогенни частици решава диагностични проблеми в полза на спиране на лечението поради възстановяване или продължаване на терапията поради липсата на ефективност. Методът е възможно най-специфичен за HBV вируса и има приемлива грешка.

Показания и цели на прилагане

Количественият анализ на хепатит В е най-надеждният и ви позволява да потвърдите данните, получени чрез методи на ензимен имуноанализ. Предписва се за:

1. получаване на положителен диагностичен резултат от ELISA;
2. лечение на пациент с диагностицирано вирусно увреждане на черния дроб;
3. при диагностициране на хепатит със смесена етиология;
4. ако е необходимо, определете вирусния товар на пациента.

Тъй като методът на ензимен имуноанализ се използва по-широко в практиката на специалистите по инфекциозни заболявания, някои пациенти с лек ход на заболяването могат да бъдат лекувани без да е необходимо да се изчислява вирусното натоварване. Но PCR обикновено се счита за „златен стандарт“ за диагностика в хепатологията, тъй като поради недвусмислеността на резултата елиминира редица организационни въпроси. Следователно насочването на пациент за количествен анализ има следните цели:

• получаване на данни за броя на вирусните частици в кръвта на пациента;
• потвърждаване на острия ход на хепатита и навременна проверка на хроничността на заболяването;
• постоянно идентифициране на латентни вирусоносители с положителни ELISA тестове, проследяване на тяхната виремия;
• вземане на решение за предписване на антивирусно лечение, неговата комбинация и прекратяване.

Най-важната цел на използването на количествен PCR тест за откриване на HBV е да се определят възможни комбинации от лечение. В случаите с висок вирусен товар резултатът от анализа дава възможност на специалиста да започне комбинирането на лекарства. По време на терапията, въз основа на резултата от PCR, е лесно да се определи ефективността на предписаното фармакологично лечение. Водейки се само от данните на имуноензимните методи, е невъзможно да се определи своевременно фактът на излекуване и неговата текуща ефективност. Следователно, количественият тест в реално време е необходим анализ преди започване на лечение за остър хепатит, латентно вирусно носителство с висока виремия и хроничен HBV.

Тълкуване на резултатите от qPCR теста

Тълкуването на резултатите от количествения PCR тест трябва да се извърши от лекуващия лекар на пациента. Необходимо е да се оцени диагностичният индикатор и да се определи терапевтичната тактика.

Стандартният анализатор е в състояние да произведе количествен индикатор, който отразява броя на копията на вирусната ДНК, присъстваща в изследваната венозна кръв. Мерните единици са копия/ml, IU/ml (копия на милилитър, международни единици на милилитър). Тълкуването на резултатите е дадено в таблицата, посочваща различните мерни единици.

Анализаторът е в състояние да произведе един индикатор за качество „не е открит“. Това означава, че ДНК на вируса в тестовите материали не е определена или броят им е под чувствителността на апарата (диагностична норма).

Анализаторът разпределя стойности в линеен диапазон на концентрация. В съвременните устройства се определя от усилвател на детекция и варира от 750 до 1*10 8 копия на милилитър. В международни единици на милилитър - от 360 до 4,8 * 10 7.

Спорни въпроси при интерпретацията на резултатите

Дешифрирането на показателите, определени с количествен PCR анализатор, ни позволява да направим единственото възможно заключение за състоянието на пациента. Има обаче значение, което предизвиква двусмислени тълкувания. Резултатът „не е открит“ може да показва или пълното отсъствие на вирусни частици на хепатит B, или техният нисък брой, т.е. под линейния диапазон, уловен от детектиращия усилвател. Тъй като анализът се извършва след положителен ензимен имуноанализ, вероятността от контакт с вируса е висока. Това е или условна норма (реакция след ваксинация), или ниска виремия след инфекция. Тактиката за наблюдение, както при умерена виремия, трябва да включва анализ на аминотрансфераза и чернодробна ултрасонография с повторен ELISA.

В други клинични ситуации дешифрирането на количествен PCR тест означава решаване на диагностични трудности, възникнали поради недостатъците на ELISA изследванията. Това е окончателният метод за определяне дали вирусът присъства в кръвта на пациента, дали е способен да причини развитието на хроничен хепатит или това е нормата на клиничното протичане. В същото време способността за откриване на HBV ДНК в инкубационния период преди синтеза на антитела гарантира ранно откриване. Това е важно диагностично предимство, което значително влияе върху прогнозата на непредпазена явна инфекция. Това може да се случи, когато опериращият хирург или пациент се заразят по време на кръвопреливане.