HBV DNS kvantitatīvā norma. Hepatīta PCR un bioķīmiskās analīzes interpretācija. Imunoloģiskās diagnostikas metodes

Hepatīts ir iekaisīga aknu patoloģija, kas rodas vīrusu iekļūšanas orgānā vai indes un toksīnu iedarbības dēļ, izraisot hepatocītu (orgāna funkcionālo šūnu) iznīcināšanu. Vieglā formā slimība dziedē pati. Sarežģītos gadījumos tas izraisa nopietnas komplikācijas: fibrozi, cirozi vai onkoloģiju. Ir noteikti pieci vīrusu hepatīta veidi: A, B, C, D un E. Pēc īpašu pētījumu rezultātiem var noteikt, vai konkrētai personai ir slimība un kādā formā.

Hepatīta izraisītāji ir hepatotropie vīrusi. Tie iekļūst aknu šūnās, integrējas to genomā, izjauc struktūru un izraisa audu nekrozi. Tie reti iesakņojas citos orgānos. Vīrusi neiznīcina aknu šūnu, bet izmanto to savairošanai.

Cilvēka imūnsistēma intensīvi cīnās ar vīrusiem, cenšoties tos novājināt un pārtraukt vairoties. Bet jo spēcīgāka cīņa, jo vairāk hepatocītu mirst. Tas izraisa iekaisuma (hepatīta) attīstību un aknu darbības traucējumus.

Ar labu imunitāti aknas var patstāvīgi atbrīvoties no vīrusa un uzvarēt slimību. Tas notiek ar A, E un B tipa slimībām. Ja imūnsistēma zaudē cīņu, hepatīts kļūst hronisks (īpaši ar C, D un retāk B vīrusa tipiem).

Ir pieci slimības veidi:

1. A hepatīts (izraisa HAV). Pārnešanas ceļš ir fekāli-orāls. Netīrība, nemazgāta pārtika un netīrs ūdens ir infekcijas izraisītāji. Dažreiz tas tiek pārraidīts intimitātes laikā. Tam bieži ir viegla forma un tas noved pie pilnīgas atveseļošanās ar sekojošu imunitātes veidošanos. Reti smagie veidi ir letāli. Vakcinācija tiek veikta.
2. B hepatīts (HBV). Tas nonāk organismā caur šķidru bioloģisku materiālu (asinis, sēklu šķidrums) un nonāk bērnā dzimšanas brīdī. Lietojot lietotu šļirci narkotiku injicēšanas laikā (narkomāni ir apdraudēti). Izmantojot nesterilus un atkārtoti lietojamus instrumentus slimnīcas apstākļos (personāla nolaidības dēļ). Ar donoru asiņu infūziju bez iepriekšējas pārbaudes. Ir vakcīna.
3. C hepatīts (HCV). Viņi inficējas, tāpat kā ar B hepatītu. Vakcīnas vēl nav.
4. D hepatīts (HDV) skar tikai tos, kuri ir inficēti ar HBV. Sakarā ar dubultu uzbrukumu aknām, slimības smagums palielinās. Vakcinācija pret B aizsargā arī pret HDV.

Ja vīrusu hepatīts ilgst ilgi un slepeni, tas noved pie bīstamām un neatgriezeniskām sekām. Zinot šo faktu, ir stimuls nepalaist garām slimību un veikt savlaicīgus pasākumus.

B hepatīts ir aknu iekaisuma patoloģija, kas parādās sakarā ar B vīrusa iekļūšanu orgānā.Slimība ir bīstama ar risku saslimt ar aknu cirozi vai orgāna onkoloģiju.

Slimības iekļūšanas ceļi:

• izmantojot lietotu šļirci injekcijām;
• caur nesteriliem un atkārtoti lietojamiem instrumentiem medicīnas iestādēs (personāla nolaidības dēļ);
• donoru asiņu izmantošana bez iepriekšējas pārbaudes;
• neaizsargāta dzimumakta prakse;
• vertikāla pārnešana no mātes, kas cieš no slimības, bērnam.

Zinot slimības pazīmes, varēsiet laikus atpazīt slimību un sākt ārstēšanu:

1. Slikta dūša un vēlme vemt.
2. Apetītes zudums.
3. Diskomforta sajūta zem ribām labajā pusē.
4. Sāpīgas sāpes locītavās.
5. Zarnu kustības biežuma un konsekvences novirzes (bezkrāsaini izkārnījumi, tumšs urīns).
6. Dzeltena ādas krāsojuma parādīšanās.
7. Letarģija un ātrs nogurums.

Mūsdienās nav tādu medikamentu, kas pilnībā izvadītu vīrusu no organisma un pilnībā izārstētu. Bet ja iekšālaiks veikt terapeitiskos pasākumus, nodrošināt plīts drošību jenu, un tas ir iespējams.

B hepatīta vīrusa DNS var noteikt, izmantojot PCR (polimerāzes ķēdes reakciju). Aizdomas par slimību - klīnikā, izmantojot laboratorijas un instrumentālās metodes. Sākumā patoloģija ir latenta (inkubācijas periods), pēc tam tā nonāk saasināšanās stadijā.

Laika gaitā tā kļūst par hronisku slimību, bet to ietekmē vīrusu skaits un terapijas kvalitāte. Ir ļoti svarīgi novērst pēdējo posmu.

Ir augstas kvalitātes enzīmu imūntests, kas pārbauda vīrusa DNS klātbūtni. Bet viņš nav pilnīgi objektīvs. Kad tas tiek veikts, patogēna patogēna klātbūtne orgānos netiek atklāta.

Tas palīdz identificēt:

• Kā imūnsistēma reaģē uz infekciju?
• vai asinīs ir antigēni un antivielas.

Tāpēc novērošanas terapija ir sarežģīta. Pēc šīs metodes nav iespējams pierādīt, ka cilvēks ir atveseļojies. Atklāt un identificēt B hepatīta vīrusa DNS, kas nav apstiprināts ar kvalitatīvu analīzi, izmantojot kvantitatīvo analīzi.

Šī analīze ir uzticama un tiek noteikta šādos gadījumos:

1. Ar enzīmu saistītais imūnsorbcijas tests (ELISA) antivielu noteikšanai ir pozitīvs.
2. Tika konstatēta vīrusu aknu patoloģijas klātbūtne.
3. Pastāv vairāku veidu hepatīta iespējamība.

Ja slimība ir viegla un bez komplikācijām, nav nepieciešams noteikt vīrusu slodzi. Pacients tiek ārstēts, pamatojoties uz ELISA indikācijām.

Medicīnas zinātnē ir izstrādāta polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) metode, ar kuras palīdzību tiek noteikta gan vīrusa DNS klātbūtne, gan tās daudzums asinīs.

Lai noteiktu B hepatīta vīrusa DNS, tiek veikta PCR, lai saskaitītu HBV daļiņu skaitu asins seruma tilpuma vienībā. Hepatīta vīrusa līmenis tiek uzskatīts par normālu, ja nav dubultas DNS infekcijas.

T Kāda veida diagnostikai ir mērķis:

1. Aprēķiniet vīrusa daļiņu skaitu seruma tilpuma vienībā.
2. Apstipriniet akūtu hepatītu.
3. Savlaicīgi novērsiet slimības pāreju hroniskā formā.
4. Identificējiet vīrusu nesējus ar pozitīviem ELISA rezultātiem.
5. Pēc ārstēšanas uzraudzīt vīrusu atgriešanos.
6. Pieņemiet pareizo lēmumu par terapijas izrakstīšanu, apvienošanu vai pārtraukšanu.

Pēc inkubācijas perioda beigām akūts hepatīts dod pozitīvu PCR rezultātu pēc septiņām līdz četrpadsmit dienām.

Pirms asins izrakstīšanas analīzei ārsts jautā pacienta slimības vēsturi:

• vai zāles tika injicētas vēnā;
• vai kāda cita asinis tika ielietas vai ziedotas kā donors;
• vai ir bijušas kādas operācijas;
• vai ir bijuši ādas bojājumi;
• vai bijušas apšaubāmas seksuālās attiecības;
• vai ir bijuši kontakti ar cilvēkiem, kas inficēti ar B hepatītu.

Asinis analīzei tiek ņemtas no vēnas tukšā dūšā no rīta no pulksten 7 līdz 9, lai rezultāti būtu ticami.

Sagatavojieties asins savākšanai, ievērojot noteikumus:

• neēdiet treknu pārtiku 12 stundas, nedzeriet alkoholiskos dzērienus, nesmēķējiet;
• izvairīties no fiziskām un sporta aktivitātēm;
• ziņot laboratorijai, ja esat lietojis medikamentus (ja iespējams, izvairieties no to lietošanas);
• Bērniem, kas jaunāki par pieciem gadiem, pusstundu pirms asins paraugu ņemšanas ar desmit minūšu intervālu jāizdzer divi simti gramu vārīta ūdens.

HBV DNS koncentrāciju mēra kopijās/ml vai me/ml.

Novērtējot pētījuma rezultātus, mēs vadāmies pēc šādiem rādītājiem:

• < 2х10, что означает при расшифровке, что острая стадия не станет хронической;
• no 2x10^4 līdz 2x10^6 – trīsdesmit procentos gadījumu tas kļūs hronisks;
• >2x10^6 – deviņdesmit piecos procentos gadījumu tā kļūs hroniska.

Kvantitatīvā PCR ir galvenā metode, lai diagnosticētu B hepatīta paasinājumus un identificētu latentu infekcijas nesēju ar augstu HBV virēmiju.

Lai noteiktu infekciju (HBV DNS), tiek veikts hepatīta PCR tests. Šāda veida diagnostiskā kaitīgo mikroorganismu noteikšana nāk palīgā ne tikai ar B hepatītu. Lai orgānos atrastu slepenus un grūti nosakāmus patogēnus, ginekoloģiskajā un uroloģiskā praksē infekcijas apstiprināšanai vai atspēkošanai bieži izmanto PCR.

Pārbaudot asinis, viņi atklāj:

• A, B, C, D un TT hepatīts;
• HIV infekcija;
• aknu patoloģijas;
• visu veidu herpes;
• citomegalovīrusi;
• enterovīrusa infekcija;
• toksoplazmoze;
• masaliņas;
• citas vīrusu izraisītas slimības.

Šī metode ir piemērota ne tikai slimību diagnosticēšanai, izmantojot asins serumu. Analīzei tiek ņemti arī citi biomateriāli. Tas ir siekalas, dzimumorgānu uztriepes, ejakulāts.

Līdz ar to paplašinās to slimību saraksts, kurām indicēta PCR diagnostika:

1. Tuberkuloze.
2. Salmoneloze.
3. Difterija.
4. Veneriskās slimības.
5. Vīrusu papilomas

PCR ir viena no obligātajām pārbaudēm sievietei, kura nēsā bērnu. Lai novērstu patoloģisku grūtniecības gaitu un novirzes mazuļa attīstībā, ir jāizslēdz iespēja mātei inficēties ar bīstamām slimībām.

B hepatīta vīrusa DNS kvantitatīvās analīzes termiņš

PCR bez kļūdām ar augstu precizitāti atklāj vīrusa klātbūtni agrīnā stadijā. Pārbaudot, izmantojot ELISA, antigēns parādās tikai divus mēnešus pēc inficēšanās. Ar PCR - pēc trīsdesmit dienām. Tiek atklāts ne tikai parastais vīruss, bet arī mutācijas celmi, kurus neviena cita analīze nevar noteikt.

Ir standarta skaitļi, lai noteiktu vīrusu. Pētījuma laikā iegūtās vērtības tiek salīdzinātas ar tām un tiek izdarīti secinājumi par slimības attīstības pakāpi vai tās neesamību. PCR analīzes dati tiek izsniegti pēc divām nedēļām.

Bieži vien cilvēki nezina, ka viņiem ir bijis B hepatīts. Viņi to sajauc ar saaukstēšanos vai gripu. Slimības dēļ palielinās risks iegūt nopietnas aknu komplikācijas dzīves laikā. Tāpēc labāk ir rīkoties droši un sazināties ar infekcijas slimību speciālistu.

Pacients, saņēmis testa rezultātus, mēģina izdarīt secinājumus par hepatīta klātbūtni un noteikt slimības attīstības stadiju. Šajā gadījumā bieži tiek pieļauta kļūda, novērtējot patieso lietu stāvokli. Lai no tā izvairītos, viņi vēršas pie ārstiem pēc padoma.

Medicīnas speciālisti šajā jomā:

1. Virusologs.
2. Hepatologs.
3. Infekcijas slimību speciālists.

Kvantitatīvā PCR testa analīzi atšifrē ārstējošais ārsts, un, pamatojoties uz rezultātu, tiek novērtēts B hepatīta gaitas raksturs un indikācijas turpmākai diagnostikai.

Palīdz izvēlēties nepieciešamo ārstēšanu vai atcelt to, ja pacientam nav slimības.

Pēc atšifrēšanas infektologs objektīvi novērtēs pacienta veselības stāvokli, nozīmēs pareizu ārstēšanu un sniegs padomu.

Lai izvairītos no problēmām, kas saistītas ar šo slimību, hepatologi stingri iesaka vakcinēties pret B hepatītu. Vakcīnas ieviešana sniedz absolūtu garantiju, ka cilvēks tiks pasargāts no slimības.

Vakcīna tiek ievadīta:

• visi bērni tūlīt pēc piedzimšanas;
• medicīnas iestāžu darbinieki;
• tiem, kas saņem kāda cita asiņu infūziju.

Ievadītās vakcīnas iedarbības ilgums ir atkarīgs no katra cilvēka imunitātes individuāli (no 10 līdz 20 gadiem). Ja nepieciešams, vakcināciju atkārto.

Polimerāzes ķēdes reakcija ir asins analīzes veids, kas ļauj precīzi noteikt B hepatīta vīrusu.Metodes īpatnība ir tā, ka tā spēj uzrādīt HBV agrīnā stadijā – mēneša laikā pēc inficēšanās, savukārt specifisks antigēns pacients tiek atklāts tikai pēc 2 mēnešiem. PCR var atklāt ne tikai parastu DNS vīrusu, bet arī mutantu celmus, kurus nevar noteikt neviena cita analīze.

Atšifrējot B hepatīta PCR, rezultātus salīdzina ar standarta vērtībām. Pamatojoties uz to, tiek izdarīti secinājumi par slimības klātbūtni (pozitīvs rezultāts), vīrusa koncentrāciju (aktivitāti) vai slimības neesamību (negatīvs rezultāts). Datu apstrāde ilgst 2 nedēļas.

B hepatītam ir paredzēti 2 diagnostikas veidi. Kvalitatīva PCR ļauj ar 100% precizitāti pateikt, vai HBV ir vai nav asinīs. Kvantitatīvā PCR parāda vīrusa aktivitāti, tas ir, cik daudz HBV DNS fragmentu ir 1 ml asiņu.

Kvalitatīvais PCR un tā interpretācija

B hepatīta asins analīze, izmantojot PCR metodi, var atklāt tikai DNS fragmentu klātbūtni. Tas tiek nozīmēts, ja pacientam ir aizdomas par inficēšanos ar HBV vai ja citas diagnostikas metodes, piemēram, seroloģiskie testi, nesniedz skaidru atbildi. Rezultātu atšifrēšana, veicot kvalitatīvu analīzi, ir ļoti vienkārša:

• negatīvs rezultāts - nav vīrusa;
• pozitīvs rezultāts - vīruss ir atklāts.

Kvalitatīvas PCR mērķis ir apstiprināt vai atspēkot B hepatīta vīrusa klātbūtni, kā arī veikt agrīnu diagnostiku. Ja HBV tiek atklāts 1-2 nedēļu laikā pēc inficēšanās, tad ārstēšana būs visefektīvākā. Aktīvi attīstoties HBV 2 mēnešus vai ilgāk, slimība kļūst hroniska un nav pilnībā izārstējama.

Gadījumā, ja kvalitatīvā hepatīta PCR uzrāda vīrusa klātbūtni, nākamais solis ir kvantitatīvā diagnoze.

Kvantitatīvā PCR

Lai nozīmētu efektīvu ārstēšanu vai novērtētu terapijas rezultātus, nepietiek tikai ar to, ka pacientam ir HBV. Ir nepieciešams kvantitatīvi noteikt B hepatīta vīrusa DNS vērtību 1 ml asiņu, tas ir, vīrusa slodzi uz ķermeni. Šis B hepatīta PCR veids tiek veikts šādos gadījumos:

1. Pirms ārstēšanas iecelšanas.
2. Lai novērtētu terapijas efektivitāti.
3. Noteikt vīrusu rezistences attīstību pret lietotajām zālēm.
4. Lai noteiktu slimības attīstības stadiju.

Vīrusa mērvienība ir starptautiskās vienības (IU/ml) vai DNS kopiju skaits/ml, tas ir, DNS fragmentu skaits uz 1 ml asiņu. Attiecība starp abām vienībām ir atkarīga no izvēlētās testa sistēmas un ir robežās no 2 līdz 7 kopijām/ml 1 SV/ml. Ja sistēma nav zināma, tad pārrēķinam tiek izmantota vidējā vērtība:

1 SV/ml = 5 kopijas/ml

Ja nekavējoties tiek veikta kvantitatīvā analīze, tad slimības diagnosticēšanas robežnorma ir 75 SV/ml. Ja rezultāts ir augstāks par šo rādītāju, tiek veikta HBV diagnoze, ja rezultāts ir zemāks, HBV netiek atklāts.

Kvantitatīvās PCR interpretācija

B hepatīta gadījumā PCR standarti ir šādas vīrusu slodzes (virēmijas) vērtības, kopijas/ml:

• < 10^3 - нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
• no 10^4 līdz 10^5 - slodze ir zema, vīruss parasti ir neaktīvs;
• 10^6 - slodze ir mērena, vīruss ir aktīvs;
• 10^7 - augsta virēmija, vīruss ir ļoti aktīvs.

Kvantitatīvi zinot, kā vīruss uzvedas organismā, var noteikt slimības formu (hronisku, akūtu vai pārnēsāto), papildu pētījumu nepieciešamību, organisma un vīrusa reakciju uz ārstēšanu:

1. Hronisks B hepatīts tiek diagnosticēts, ja transamināžu vērtība ir augstāka par normālu, vīrusa aktivitāte ir lielāka par 4 un DNS kopiju koncentrācija uz mililitru asiņu ir 10^5 kopijas.
2. Pārnēsāšana tiek noteikta pēc sekojošā attēla, ko sniedz rezultāti - koncentrēšanās< 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
3. Ārstēšanas laikā HBV rezistence tiek pastāvīgi uzraudzīta. Pārbaudes tiek veiktas ik pēc 3 mēnešiem. Ja vienā brīdī virēmija hepatīta laikā palielinās 10 reizes, tas nozīmē, ka HBV ir pielāgojies lietotajām zālēm – kļuvis rezistents.
4. Labvēlīgs ārstēšanas kurss parādīs virēmijas samazināšanos par 85% 3 dienas pēc terapijas sākuma.
5. Pacients saņem nosūtījumu uz aknu biopsiju tikai tad, ja ALAT (alanīna aminotransferāzes) līmenis pārsniedz normālo vērtību ne vairāk kā 2 reizes 6 mēnešu laikā, un B hepatīta PCR uzrāda virēmiju > 10^5 kopijas/ml. Ja ar augstu vīrusu aktivitāti ALAT līmeņa paaugstināšanās tiek novērota vairāk nekā 2 reizes sešos mēnešos, tad nekavējoties tiek nozīmēta pretvīrusu terapija.

Lai noskaidrotu, kā DNS hepatīts uzvedīsies hroniskuma ziņā, tas ir, pārejot uz hronisku formu no akūtas formas, tiek izmantoti arī PCR diagnostikas rezultāti:

• HBV DNS< 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
• HBV DNS svārstās no 2 x 10^4 līdz 2 x 10^6 kopijām/ml, kas nozīmē, ka katram 4. pacientam būs hronisks HBV, tas ir, hroniskums ir 25-30%;
• HBV DNS > 2 x 10^6 kopijas/ml nozīmē, ka hroniskas slimības formas iegūšana ir neizbēgama.

Sagatavošanās pārbaudei

Lai noteiktu HBV klātbūtni, izmantojot PCR, tiek veikta asins analīze no vēnas. Procedūra vienmēr tiek veikta stingri tukšā dūšā, un vislabāk ir nokļūt laboratorijā no rīta, kad dabiskais atpūtas laiks no ēšanas ir 8 stundas. Lai izmeklējumu rezultāti būtu pareizi, iepriekš jāzina, kā pareizi sagatavoties došanai uz klīniku. Papildu darbības ir:

1. 12 stundas pirms procedūras izvairieties no taukainas pārtikas, smēķēšanas, alkohola un sporta.
2. Tieši pirms asins nodošanas atpūtieties 20 minūtes.
3. Pirms procedūras uzsākšanas Jums jāinformē medmāsa par medikamentiem, ko lietojat.

Uzmanību! Ja diagnoze tiek veikta bērnam, kas jaunāks par 5 gadiem, tad pusstundu pirms procedūras viņam ik pēc 10 minūtēm jādod 1 glāze vārīta ūdens.

Summējot

Mūsdienās PCR diagnostika B hepatīta noteikšanai ir visprecīzākā metode. Metode ļauj redzēt slēptās un mutācijas slimības formas, identificēt slimību pirmajās nedēļās pēc inficēšanās un attiecīgi veikt efektīvu ārstēšanu. Atkarībā no situācijas tiek veikta kvalitatīva vai kvantitatīva PCR, kuras mērķis ir identificēt HBV un noteikt tā aktivitāti. Lai veiktu pārbaudi, jums jāsazinās ar virusologu, infekcijas slimību speciālistu vai hepatologu.

B hepatīts ir vīrusu infekcija, kas ietekmē aknas. Mūsdienās aptuveni 300 miljoni cilvēku visā pasaulē ir B hepatīta nesēji.

Dažos gadījumos vīruss progresē līdz aknu cirozei vai hepatocelulārai karcinomai (vēža pirmajai stadijai). Jaunām pretvīrusu slimību izpētes stratēģijām ir divi mērķi:

• noteikt, cik jutīgs ķermenis ir pret vīrusu slodzi;
• noteikt vīrusa rezistenci pret medikamentiem un citām medicīniskām iejaukšanās darbībām.

Hepatīta testu iezīmes

Seroloģisko testu mērķis ir noteikt antigēnus un antivielas asins serumā, taču šī metode nav uzticama. Tāpēc zinātnieki izstrādāja polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) metodi. Tas ļauj ne tikai kvalitatīvi noteikt vīrusa klātbūtni (ir vai nav), bet arī kvantitatīvi (cik daudz antivielu ir asins serumā).

Pirms asiņu savākšanas ārstam jānoskaidro:

Akūta hepatīta gadījumā pozitīvu rezultātu var noteikt 1-2 nedēļas pēc inkubācijas ar PCR.

Asins analīzes, lai noteiktu B hepatīta vīrusu (HBV), tiek veiktas šādos gadījumos:

Pārbaudes regulāri tiek veiktas arī no riska grupām, tostarp:

• cilvēki, kuriem nepieciešama bieža asins pārliešana;
• pacienti, kuriem tiek veiktas notiekošas asins attīrīšanas procedūras nieru mazspējas dēļ;
• cilvēki ar AIDS vai HIV infekciju;
• sieviete stāvoklī;
• veselības aprūpes darbinieki, kas pakļauti asinīm;
• pacientiem ar aknu slimības simptomiem.
• tiem, kas tiek ārstēti no cirozes, vēža un citām aknu slimībām.

Lai sagatavotos kvantitatīvās analīzes veikšanai, ir jāievēro šādi noteikumi:

Efektīva slimības terapija ietekmē vīrusa DNS daudzuma samazināšanos serumā. Sešus mēnešus pēc ārstēšanas sākuma vīrusa daudzumam vajadzētu samazināties par 2-3 kārtām. Ja testa rezultāti laika gaitā nav mainījušies vai, gluži pretēji, ir pasliktinājušies, tad ir jāmaina visa terapija, un akūts hepatīts automātiski tiek pārdēvēts par hronisku.

Kad hepatīta vīrusa DNS nonāk organismā, infekcija var notikt divos veidos:

Kā tiek veikta asins savākšanas procedūra? Ārsts pievelk pacienta apakšdelmu ar žņaugu un iedur adatu vēnā uz elkoņa, pēc tam ievelk asinis šļircē un ielej speciālā mēģenē. Rezultāti būs gatavi pēc dažām dienām, periods atkarīgs no pacienta pārbaudes vietas.

Materiāls ir asins serums, limfocīti, hepatobiopsija, ko ievieto mēģenē ar labi uzskrūvētu vāciņu. Bet rezultātu var ietekmēt piesārņots materiāls paraugu ņemšanai, materiāla pārmērīga ekspozīcija (to uzglabā līdz 24 stundām temperatūrā, kas nav augstāka par +4 ° C).

Kvantitatīvās analīzes metodes

Ir vairākas kvantitatīvās analīzes metodes, tostarp PCR, ELISA un bioķīmija.

PCR (polimerāzes ķēdes reakcija).

Šis ir virsmas antigēna proteīna tests, kas veido daļu no vīrusa ārējā apvalka. Pēc vīrusu daļiņu iekļūšanas organismā tās sāk intensīvu reprodukciju uz aknu virsmas, iznīcinot veselās orgāna šūnas. Jaunas molekulas tiek izlaistas asinīs.

Pamatojoties uz to, tiek pārbaudīts antivielu koncentrācijas līmenis serumā un tiek noteikts, vai ir vai nav inficēšanās ar B hepatītu.

Materiāls pētījumam tiek ņemts tukšā dūšā. PCR veic iekārtā, ko sauc par cikleri.

PCR analīzes algoritms:

Pēc tam šīs darbības tiek atkārtotas daudzas reizes, un dažu stundu laikā tiek pabeigti 35-45 cikli, veidojas miljardiem vēlamā parauga kopiju. Ja ir šādas kopijas, tad to skaitu aprēķina uz 1 ml analīzes materiāla.

ELISA

Papildus PCR ir ELISA (ar enzīmu saistītā imūnsorbcijas pārbaude) metode. Tas nosaka ne tikai virsmas antivielas, bet arī tās, kas atrodas iekšā un ir savstarpēji saistītas ar iepriekšējiem antigēniem, kā arī to daudzumu.

Vēl viena kvantitatīvās analīzes metode. Vīrusam nokļūstot organismā no bojātām aknu šūnām, izdalās fermenti, ja to daudzums ir lielāks par normu, tad var runāt par infekciju. Turklāt jums ir jānosaka vīrusu slodze (DNS-HBV), jāveic aknu testi (bilirubīnam ar frakcijām, ALAT, ASAT, sārmainās fosfatāzes, gamma-GT). Obligāti jāapmeklē infektologs, kurš nepieciešamības gadījumā nosūta pacientu uz fibroelastometriju un izvēlas ārstēšanas kursu.

Bioķīmija - kvantitatīvā analīze

Reāllaika PCR

Šajā metodē kopiju meklēšana notiek pēc katra cikla, nevis pēc 35-45. Metode darbojas tāpat kā PCR, tā ļauj noteikt kopiju skaitu paraugā pētniecībai. Tādējādi tiek ievērojami samazināts analīzes laiks, vienlaikus garantējot 100% rezultātu.

B hepatīta DNS noteikšana

B hepatīta DNS daudzuma noteikšana ir ļoti svarīga, jo ar zemu līmeni slimības prognoze ir labvēlīgāka nekā ar augstāku līmeni. HBV DNS koncentrāciju mēra kopijās/ml vai me/ml

1 me/ml = 2,83×10 kopijas/ml

Šīs analīzes rezultāti var būt šādi:

Ja testa rezultāts ir pozitīvs, tiek diagnosticēts:

• B hepatīta vīrusa pārnēsāšana;
• hroniska hepatīta slimība;
• akūta B hepatīta slimība.

Ja rezultāts ir negatīvs, tad:

Retos gadījumos negatīvs B hepatīta vīrusa DNS testa rezultāts liecina par ātru un ļaundabīgu slimības gaitu.

Lēmumu par vīrusa pārbaudi pieņem:

• terapeits;
• virusologs;
• hematologs;
• infekcijas slimību speciālists

Kvantitatīvā analīze ir obligāta, diagnosticējot slimību, un tā jāveic pirms terapijas uzsākšanas. Bet jāatceras, ka B hepatīts dažkārt ir cieši saistīts ar D hepatītu, kas var radīt papildu grūtības, veicot šādu analīzi. Tāpēc jāņem vērā šādas komplikācijas:

• pastāvīgs hronisks hepatīts;
• aknu ciroze;

riska pacientu skrīningam un identificēšanai:

• pacienti ar biežu asins pārliešanu;
• pacienti ar hronisku nieru mazspēju;
• pacienti ar vairāku hemodialīzi;
• pacienti ar imūndeficīta stāvokļiem, tostarp AIDS.

Pētījuma rezultāti tiek izteikti kvalitatīvi – pozitīvi vai negatīvi. Negatīvs testa rezultāts norāda uz HBsAg trūkumu asins serumā. Pozitīvs rezultāts - HBsAg noteikšana norāda uz akūta vīrushepatīta B, kā arī hroniska vīrusu hepatīta B inkubācijas vai akūtu periodu.

Antivielas pret B hepatīta vīrusa kodola antigēnu JgG (anti-HBcAg JgG)

Parasti anti-HBcAg JgG serumā nav.
Pacientiem anti-HBcAg JgG parādās vīrushepatīta B akūtā periodā un saglabājas visu mūžu. Anti-HBcAg JgG - vadošais iepriekšējās HBV infekcijas marķieris.

Asins analīzes, lai noteiktu anti-HBcAg JgG klātbūtni, tiek izmantotas, lai diagnosticētu:

• hronisks vīrusu B hepatīts HBs antigēna klātbūtnē asins serumā;
• pārnests vīrushepatīts B.

Studiju rezultātu izvērtēšana

Pētījuma rezultāts tiek izteikts kvalitatīvi – pozitīvs vai negatīvs. Negatīvs testa rezultāts norāda uz anti-HBcAg JgG trūkumu asins serumā. Pozitīvs rezultāts – anti-HBcAg JgG noteikšana liecina par akūtu infekciju, atveseļošanos vai iepriekšēju vīrusu B hepatītu.

B hepatīta vīrusa “e” antigēns (HBeAg)

Parasti asins serumā nav HBeAg.
HBeAg var noteikt asins serumā lielākajai daļai pacientu ar akūtu vīrusu hepatītu B. Tas parasti pazūd asinīs pirms HBs antigēna. Augsts HBeAg līmenis slimības pirmajās nedēļās vai tā noteikšana ilgāk par 8 nedēļām dod pamatu aizdomām par hronisku infekciju.

Šo antigēnu bieži konstatē vīrusu etioloģijas hroniska aktīva hepatīta gadījumā. Īpaša interese par HBeAg noteikšanu ir saistīta ar to, ka tā noteikšanu raksturo Infekcijas procesa aktīvā replikācijas fāze. Ir konstatēts, ka augsta HBeAg koncentrācija atbilst augstai DNS polimerāzes aktivitātei un raksturo vīrusa aktīvo replikāciju.

HBeAg klātbūtne asinīs liecina par tā augsto infekciozitāti, t.i. aktīvas B hepatīta infekcijas klātbūtne pētāmās personas ķermenī, un tā tiek konstatēta tikai tad, ja HBs antigēns atrodas asinīs. Pacientiem ar hronisku aktīvu hepatītu pretvīrusu zāles lieto tikai tad, ja asinīs tiek konstatēts HBeAg. HBeAg – antigēns – B hepatīta vīrusa akūtās fāzes un replikācijas marķieris.

Asins analīzi HBe antigēna klātbūtnei izmanto, lai diagnosticētu:

• vīrushepatīta B inkubācijas periods;
• vīrusu hepatīta B prodromālais periods;
• akūts vīrusu hepatīta B periods;
• hronisks pastāvīgs vīrusu hepatīts B.

Studiju rezultātu izvērtēšana

Pētījuma rezultāts tiek izteikts kvalitatīvi – pozitīvs vai negatīvs. Negatīvs testa rezultāts norāda uz HBeAg trūkumu asins serumā. Pozitīvs rezultāts - HBeAg noteikšana norāda uz akūta vīrushepatīta B inkubācijas vai akūtu periodu vai notiekošu vīrusa replikāciju un pacienta infekciozitāti.

Antivielas pret B hepatīta vīrusa antigēnu “e” (anti-HBeAg)

Anti-HBeAg serumā parasti nav. Anti-HBeAg antivielu parādīšanās parasti liecina par intensīvu B hepatīta vīrusa izvadīšanu no organisma un vieglu pacienta infekciju.

Šīs antivielas parādās akūtā periodā un saglabājas līdz 5 gadiem pēc inficēšanās. Hroniska persistējoša hepatīta gadījumā anti-HBeAg tiek konstatēts pacienta asinīs kopā ar HBsAg. Serokonversija, t.i. HBeAg pāreja uz anti-HBeAg, hroniska aktīva hepatīta gadījumā, bieži vien ir prognostiski labvēlīga, taču tā pati serokonversija ar smagu aknu cirozi transformāciju neuzlabo prognozi.

Asins analīzi par anti-HBeAg klātbūtni izmanto šādos gadījumos, diagnosticējot vīrusu B hepatītu:

• slimības sākuma stadijas noteikšana;
• akūts infekcijas periods;
• agrīna atveseļošanās stadija;
• atveseļošanās;
• vēlīnā atveseļošanās stadija.
• nesenā vīrushepatīta B diagnoze;
• hroniska persistējoša vīrusu hepatīta B diagnostika.

Studiju rezultātu izvērtēšana

Pētījuma rezultāts tiek izteikts kvalitatīvi – pozitīvs vai negatīvs. Negatīvs testa rezultāts norāda, ka asins serumā nav antivielu pret HBeAg. Pozitīvs rezultāts ir antivielu noteikšana pret HBeAg, kas var liecināt par akūta vīrushepatīta B sākuma stadiju, akūtu infekcijas periodu, agrīnu atveseļošanās stadiju, atveseļošanos, nesenu vīrushepatītu B vai pastāvīgu vīrusu hepatītu B.

Hroniska B hepatīta klātbūtnes kritēriji ir:

• HBV DNS noteikšana vai periodiska noteikšana asinīs;
• pastāvīgs vai periodisks ALAT/AST aktivitātes pieaugums asinīs;\
• hroniska hepatīta morfoloģiskās pazīmes aknu biopsijas histoloģiskās izmeklēšanas laikā.

B hepatīta vīrusa noteikšana ar PCR (kvalitatīvi)

B hepatīta vīruss parasti nav atrodams asinīs.
B hepatīta vīrusa kvalitatīva noteikšana ar PCR asinīs ļauj apstiprināt vīrusa klātbūtni pacienta organismā un tādējādi noteikt slimības etioloģiju.

Šis pētījums sniedz noderīgu informāciju akūta vīrushepatīta B diagnosticēšanai slimības inkubācijas un agrīnā attīstības periodā, kad pacienta asinīs var nebūt galveno seroloģisko marķieru. Vīrusu DNS asins serumā tiek konstatēta 50% pacientu, ja nav HBeAg. PCR metodes analītiskā jutība ir vismaz 80 vīrusa daļiņas 5 μl DNS parauga, specifiskums ir 98%.

Šī metode ir svarīga hroniska HBV diagnosticēšanai un gaitas uzraudzībai. Apmēram 5-10% gadījumu cirozes un citu hronisku aknu slimību cēlonis ir hroniska B hepatīta vīrusa pārnēsāšana.Šo slimību aktivitātes marķieri ir HBeAg un B hepatīta vīrusa DNS klātbūtne asinīs.

PCR metode ļauj noteikt B hepatīta vīrusa DNS asinīs gan kvalitatīvi, gan kvantitatīvi. Abos gadījumos identificētais fragments ir B hepatīta vīrusa strukturālā proteīna gēna unikālā DNS secība.

B hepatīta vīrusa DNS noteikšana biomateriālā, izmantojot PCR, ir nepieciešama:

• apšaubāmu seroloģisko pētījumu rezultātu atrisināšana;
• slimības akūtās stadijas noteikšana salīdzinājumā ar iepriekšējo infekciju vai ekspozīciju;
• pretvīrusu ārstēšanas efektivitātes uzraudzība.

B hepatīta vīrusa DNS pazušana no asinīm liecina par terapijas efektivitāti

B hepatīta vīrusa noteikšana ar PCR (kvantitatīvi)

Šī metode sniedz svarīgu informāciju par slimības attīstības intensitāti, ārstēšanas efektivitāti un rezistences veidošanos pret aktīvajām zālēm.
Lai diagnosticētu vīrusu hepatītu, izmantojot PCR asins serumā, tiek izmantotas testa sistēmas, kuru jutība ir 50-100 kopijas uz vienu paraugu, kas ļauj noteikt vīrusu tā koncentrācijā 5 X 10^3 -10^4 kopijas/ml. PCR vīrusu hepatīta B noteikšanai noteikti ir nepieciešama, lai spriestu par vīrusa replikāciju.

Vīrusu DNS asins serumā tiek konstatēta 50% pacientu, ja nav HBeAg. Asins seruma, limfocītu un hepatobiopsijas paraugi var kalpot kā materiāli B hepatīta vīrusa DNS noteikšanai.

• Virēmijas līmeni novērtē šādi:
• mazāk par 2,10^5 kopijām/ml (mazāk par 2,10^5 IU/ml) – zema virēmija;
• no 2,10^5 kopijām/ml (2,10^5 IU/ml) līdz 2,10^6 kopijām/ml (8,10^5 IU/ml) – vidēja virēmija;
• vairāk nekā 2,10^6 kopijas/ml – augsta virēmija.

Pastāv saistība starp akūta vīrushepatīta B iznākumu un HBV DNS koncentrāciju pacienta asinīs. Zemā virēmijas līmenī infekcijas hroniskuma process ir tuvu nullei, vidējā līmenī procesa hroniskums tiek novērots 25-30% pacientu, bet augstā virēmijas gadījumā - akūts vīrusu hepatīts B. visbiežāk kļūst hroniskas.

Indikācijām hroniska HBV ārstēšanai ar alfa interferonu jābūt aktīvas vīrusa replikācijas marķieru klātbūtnei (HBsAg, HBeAg un HBV DNS noteikšana asins serumā iepriekšējo 6 mēnešu laikā).

Ārstēšanas efektivitātes novērtēšanas kritēriji ir HBeAg un HBV DNS izzušana asinīs, ko parasti pavada transamināžu līmeņa normalizēšanās un ilgstoša slimības remisija, HBV DNS izzūd no asinīm līdz 5. ārstēšanas mēnesim. 60%, līdz 9. mēnesim 80% pacientu. Virēmijas līmeņa pazemināšanās par 85% vai vairāk trešajā dienā pēc ārstēšanas sākuma, salīdzinot ar sākotnējo stāvokli, kalpo kā ātrs un diezgan precīzs kritērijs terapijas efektivitātes prognozēšanai.

Mūsdienu medikamentu pieejamība pret B hepatītu (HBV) ar skaidrām indikācijām to lietošanai prasa precīzu un ātru diagnozes pārbaudi. Tomēr, ņemot vērā ierobežotos klīniskos datus slimības pirmajās nedēļās un enzīmu imūnanalīzes metožu ierobežojumus, diagnozes noteikšanas ātrums tiek samazināts.

Anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe marķieru klātbūtne ļauj apstiprināt HBV vai konstatēt iepriekšējās slimības faktu. Bet jūs varat noteikt aktīvo vīrusu daļiņu klātbūtni asinīs un saskaitīt to skaitu pētījuma laikā, izmantojot PCR - kvantitatīvu reāllaika testu B hepatīta noteikšanai. Metode, salīdzinot ar enzīmu imūnsorbcijas diagnostikas metodēm, atrisina diagnostikas problēmas un ļauj prognozēt slimības gaitu, vienlaikus lietojot pretvīrusu zāles.

B hepatīta diagnoze balstās uz klīnisko izpausmju novērtējumu, enzīmu imūntestu un instrumentālajām pētījumu metodēm. Slimība rodas akūtā fāzē pēc inkubācijas perioda un atkarībā no infekcijas devas un ārstēšanas efektivitātes nonāk hroniskā stadijā. Galvenais ārstēšanas mērķis joprojām ir hroniskuma profilakse, tas ir, visu vīrusu daļiņu izvadīšana no asinīm. Klīniskā norma slimības gaitai ir izārstēt bez sekojošas virēmijas.

Tas, ka infekcija ir likvidēta, jāpierāda ar kvantitatīvās izpētes metodi.

Tā kā jebkurš augstas kvalitātes enzīmu imūntests ļauj diagnosticēt HBV netieši, tas ir, tas neuzrāda patogēna klātbūtni organisma iekšējā vidē, bet gan raksturo imūnreakciju pret infekciju, uzraugot terapijas efektivitāti un slimības faktu. izārstēt kļūst grūti pierādīt. Tādēļ pacientam ar B hepatītu vai ar tam labvēlīgiem diagnostikas kritērijiem jāveic polimerāzes ķēdes reakcija, lai noteiktu vīrusa daļiņu skaitu asinīs. Diagnostikas norma ir infekcijas DNS kopiju neesamība.

Diagnostikas metodes apraksts

Ļoti jutīgā B hepatīta PCR diagnostikas metode ietilpst gēnu inženierijas molekulārās bioloģiskās izpētes kategorijā. To izmanto, lai noteiktu vīrusa DNS daudzumu pacienta bioloģiskajā materiālā un pieļaujamo robežu. Pamatojoties uz iegūtajiem rezultātiem, tiek noteikts vīrusu daļiņu skaits tilpuma vienībā. Diagnostikas pārbaudes materiāls ir pacienta venozās asinis. Savākšana ir vēlama tukšā dūšā, jo ir iespējama hilozā seruma ietekme uz testa rezultātu.

Iegūtie rezultāti jāiesniedz ārstam interpretācijai un turpmākās taktikas noteikšanai. Neatkarīgai dekodēšanai nav diagnostiskas vērtības.

Ar PCR metodi iegūtā vīrusu daļiņu skaita rezultāta nozīmīgums pārsniedz enzīmu imūntestu vērtību. Tā kā reāllaika analīze parāda patogēna klātbūtni asinīs, tā informācijas saturs ir augstāks nekā citiem. Ja ELISA liecina tikai par antivielu klātbūtni, kas tiek novērota no inkubācijas perioda 4 nedēļām un saglabājas ilgāk par 8 nedēļām pēc vīrusa izvadīšanas no asinīm, tad polimerāzes ķēdes reakcija skaidri apliecina slimības aktīvo gaitu vai tās norisi. izārstēt un raksturo nozīmētās terapijas dinamiku.

Polimerāzes ķēdes reakcija ar patogēnu daļiņu kvantitatīvu noteikšanu atrisina diagnostikas problēmas par labu ārstēšanas pārtraukšanai atveseļošanās dēļ vai terapijas turpināšanai tās efektivitātes trūkuma dēļ. Metode ir pēc iespējas specifiskāka HBV vīrusam, un tai ir pieņemama kļūda.

Norādes un īstenošanas mērķi

B hepatīta kvantitatīvā analīze ir visuzticamākā un ļauj apstiprināt datus, kas iegūti ar enzīmu imūnanalīzes metodēm. Tas ir paredzēts:

1. pozitīva diagnostiskā ELISA rezultāta saņemšana;
2. tāda pacienta ārstēšana, kuram diagnosticēts vīrusu izraisīts aknu bojājums;
3. diagnosticējot jauktas etioloģijas hepatītu;
4. ja nepieciešams, nosaka pacienta vīrusu slodzi.

Tā kā infektologu praksē plašāk tiek izmantota enzīmu imūnanalīzes metode, atsevišķi pacienti ar vieglu slimības gaitu var tikt ārstēti bez nepieciešamības aprēķināt vīrusu slodzi. Bet PCR parasti tiek uzskatīts par hepatoloģijas diagnostikas “zelta standartu”, jo tā rezultāta nepārprotamības dēļ tas novērš vairākas organizatoriskas problēmas. Tāpēc pacienta nosūtīšanai uz kvantitatīvo analīzi ir šādi mērķi:

• datu iegūšana par vīrusu daļiņu skaitu pacienta asinīs;
• hepatīta akūtas gaitas apstiprināšana un savlaicīga slimības hroniskuma pārbaude;
• pastāvīga latento vīrusu nesēju identificēšana ar pozitīviem ELISA testiem, to virēmijas uzraudzība;
• lēmuma pieņemšana par pretvīrusu terapijas nozīmēšanu, tās kombināciju un lietošanas pārtraukšanu.

Nozīmīgākais mērķis, izmantojot kvantitatīvo PCR testu HBV noteikšanai, ir noteikt iespējamās ārstēšanas kombinācijas. Gadījumos ar augstu vīrusu slodzi analīzes rezultāts dod speciālistam iespēju sākt kombinēt zāles. Terapijas laikā, pamatojoties uz PCR rezultātu, ir viegli noteikt noteiktās farmakoloģiskās ārstēšanas efektivitāti. Vadoties tikai pēc imūnenzīmu metožu datiem, nav iespējams savlaicīgi noteikt izārstēšanas faktu un tā pašreizējo efektivitāti. Tāpēc kvantitatīvs reāllaika tests ir nepieciešama analīze pirms akūta hepatīta, latenta vīrusa pārnēsāšanas ar augstu virēmiju un hroniska HBV ārstēšanas uzsākšanas.

qPCR testa rezultātu interpretācija

Kvantitatīvā PCR testa rezultātu interpretācija jāveic pacienta ārstējošajam ārstam. Ir nepieciešams novērtēt diagnostikas indikatoru un noteikt terapeitisko taktiku.

Standarta analizators spēj radīt kvantitatīvu indikatoru, kas atspoguļo vīrusa DNS kopiju skaitu, kas atrodas pārbaudāmajās venozajās asinīs. Mērvienības ir kopijas/ml, SV/ml (kopijas mililitrā, starptautiskās vienības mililitrā). Rezultātu interpretācija ir sniegta tabulā, kurā norādītas dažādas mērvienības.

Analizators spēj radīt vienu kvalitātes rādītāju “nav atklāts”. Tas nozīmē, ka testa materiālos vīrusa DNS nav noteikta vai to skaits ir zem ierīces jutības (diagnostikas normas).

Analizators sadala vērtības lineārā koncentrācijas diapazonā. Mūsdienu ierīcēs to nosaka ar noteikšanas pastiprinātāju un svārstās no 750 līdz 1*10 8 kopijām uz mililitru. Starptautiskajās vienībās mililitrā - no 360 līdz 4,8 * 10 7.

Pretrunīgi jautājumi rezultātu interpretācijā

Kvantitatīvā PCR analizatora noteikto rādītāju atšifrēšana ļauj izdarīt vienīgo iespējamo secinājumu par pacienta stāvokli. Tomēr ir nozīme, kas izraisa neskaidras interpretācijas. Rezultāts “nav atklāts” var norādīt uz pilnīgu B hepatīta vīrusa daļiņu neesamību vai to zemo skaitu, tas ir, zem lineārā diapazona, ko uztver noteikšanas pastiprinātājs. Tā kā analīze tiek veikta pēc pozitīva enzīmu imūntesta, kontakta ar vīrusu iespējamība ir augsta. Tā ir vai nu nosacīta norma (reakcija pēc vakcinācijas), vai zema virēmija pēc inficēšanās. Uzraudzības taktikā, tāpat kā mērenas virēmijas gadījumā, jāietver aminotransferāžu analīze un aknu ultrasonogrāfija ar atkārtotu ELISA.

Citās klīniskās situācijās kvantitatīvā PCR testa atšifrēšana nozīmē diagnostikas grūtību risināšanu, kas radušās ELISA pētījumu nepilnību dēļ. Šī ir pēdējā metode, lai izlemtu, vai vīruss atrodas pacienta asinīs, vai tas var izraisīt hroniska hepatīta attīstību, vai arī tā ir klīniskās gaitas norma. Tajā pašā laikā iespēja noteikt HBV DNS inkubācijas periodā pirms antivielu sintēzes garantē agrīnu atklāšanu. Tā ir svarīga diagnostikas priekšrocība, kas lielā mērā ietekmē neapsargātas acīmredzamas infekcijas prognozi. Tas var notikt, ja operējošais ķirurgs vai pacients inficējas asins pārliešanas laikā.