Campylobacter - Hem Ltd. Campylobacter spp: Boltonas selektīvās bagātināšanas buljons Darbības princips un barotnes īpašības

Boltonas bagātināšanas buljona bāze

Mērķis

Šķidrā barotne, ko izmanto izolēšanai Kampilobaktērija no pārtikas paraugiem, atbilstoši ISO 10272-1:2006 standartiem.

Apraksts

Bolton Broth Base ir bagātinošs buljons priekš Kampilobaktērija no paraugiem pārtikas produkti. Apstrādājot un uzglabājot pārtikas produktus, šūnas Kampilobaktērija bojātas, to vairošanos un augšanu var stimulēt ar dubultu inkubāciju Bolton buljonā.

Gaļas peptona ūdens un laktalbumīna hidrolizāts ir augšanai nepieciešami oglekļa un slāpekļa avoti. Nātrija hlorīds nodrošina osmotisko līdzsvaru, un nātrija karbonāts neitralizē skābi, kas veidojas mikroorganismu augšanas laikā. Rauga ekstrakts un ketoglutārskābe darbojas kā augšanas faktori. Nātrija metabisulfīta, nātrija piruvāta un hemīna iekļaušana neitralizē toksiskās vielas, kas var veidoties barotnē skābekļa ietekmē, un ļauj iztikt bez mikroaerobās atmosfēras. Lizētas asinis ir nepieciešamas, lai neitralizētu vidē esošos trimetoprima antagonistus.

Bagātināšanas posma selektivitāti optimizē selektīva piedeva (06-131-LYO pants): vankomicīns ir aktīvs pret grampozitīviem mikroorganismiem. Cefoperazons galvenokārt iedarbojas uz gramnegatīvām baktērijām. Trimetoprims ir efektīvs pret plašu grampozitīvu un gramnegatīvu šūnu klāstu, un cikloheksimīds vai amfotericīns B ir efektīvi fungicīdi.

Sagatavošana

13,8 g pulvera izšķīdina 500 ml destilēta ūdens, ja nepieciešams, uzsilda. Sterilizējiet autoklāvā 15 minūtes 121ºC temperatūrā. Atdzesē līdz 47-50°C, aseptiski pievienojiet 25 ml lizētu zirga asiņu un 1 pudeli selektīvā uztura bagātinātāja. Kampilobaktērija Boltona (pants 06-131-LYO). Kārtīgi samaisa. Sagatavoto barotni ielej atbilstošos traukos.

Piezīme: Ja bagātināšanas buljonu sagatavo iepriekš, to var uzglabāt plkst istabas temperatūra ne vairāk kā 4 stundas vai tumsā 3 ± 2°C temperatūrā ne ilgāk kā 7 dienas.

Sēšanas tehnika

Paraugu pievieno barotnei tādā daudzumā (pēc svara vai tilpuma), kas deviņas reizes pārsniedz Bolton Selective Enrichment buljona tilpumu, lai iegūtu testa parauga/vides attiecību 1:10 (w/v vai v/v), un homogenizē. .

Bolton Selective Enrichment Broth nav nepieciešama mikroaerobā inkubācija, bet tas ir jāizmanto cieši pieskrūvētos traukos, kas piepildīti ar mazāk nekā 20 mm brīvu vietu augšpusē.

Inkubējiet sākotnējo suspensiju 37°C temperatūrā 4-6 stundas, pēc tam 41,5°C 44 ± 4 stundas.

Izolācijas un identifikācijas metodes skatiet ISO vai Bakterioloģiskās analīzes rokasgrāmatā (BAM).

Uzglabāšana

Barotne ir paredzēta tikai laboratorijas lietošanai. Uzglabājiet barotni burkā ar cieši noslēgtu vāku, tumšā, sausā, vēsā vietā (temperatūra no +4°C līdz 30°C un mitrums<60%)

Kvalitātes kontrole

Selenīta buljons ir bagātināšanas barotne ar selektīvām īpašībām, kas paredzēta Salmonella ģints (lat. Salmonella) patogēno baktēriju izolēšanai. Tas ir ļoti efektīvs, ja ir nepieciešams atklāt šo konkrēto patogēno organismu starp citiem zarnu mikrofloras pārstāvjiem. Barotne tiek izmantota gan klīniskai diagnostikai, gan sanitāriem nolūkiem, testējot pārtikas produktus.

Vispārējās īpašības

Selenīta buljonu gatavo uz pulvera bāzes, kas ir homogenizēts dažādu kompozīcijas sastāvdaļu maisījums. Sausā materiāla krāsa var būt gaiši dzeltena vai krēmkrāsa, atkarībā no barotnes veida. Pulverim ir brīvi plūstošas īpašības.

Gatavais selenīta buljons ir caurspīdīga šķidra gaiši dzeltenas krāsas vide. Šo masu ielej traukos, kur tiek veikta sēšana tālākai inkubācijai.

Ir trīs galvenie selenīta buljona veidi:

barotne tīrā veidā - piemērota salmonellas izolēšanai gan no klīniskā, gan sanitārā materiāla;
ar mannīta (divkomponentu buljona) pievienošanu - paredzēts darbam tikai ar klīnisko materiālu;
cisteīna-selenīta barotne - var izmantot, lai izolētu salmonellu no pacienta patoloģiskā biomateriāla (fekālijām, urīnu utt.).

Šie veidi nedaudz atšķiras pēc to sastāvdaļu sastāva un darbības iezīmēm.

Selenīta buljona galvenais uzdevums ir veicināt salmonellas uzkrāšanos, nomācot pavadošās mikrofloras augšanu. Tas ļauj ne tikai noteikt patogēnu materiālā, bet arī pēc tam pārnest to uz agaru. Barotni izstrādāja Leiflers, kurš pirmais atklāja selenīta selektīvo iedarbību pret salmonellu.

Savienojums

Selenīta buljonā ir:

kazeīna hidrolizāts;
laktoze;
nātrija fosfāts;
nātrija hidroselenīts.

Selenīta-cisteīna vide papildus šīm sastāvdaļām satur L-cisteīnu un nātrija hidrogēnfosfātu. Buljona ar mannītu sastāvs atšķiras ar to, ka kazeīna hidrolizāta vietā tas satur dzīvnieku audu peptisku gremošanas procesu. Tādā vidē nav laktozes, bet ir mannīts. Pēdējais darbojas kā fermentējams substrāts un nodrošina buljona bufera īpašības.

Visas pulvera sastāvdaļas, izņemot nātrija hidroselenītu, parasti sauc par A daļu, un selektīvo vielu sauc par B daļu.

Vides darbības princips un īpašības

Selenīta buljons darbojas kā selektīvs uzglabāšanas līdzeklis. Selektīvo efektu nodrošina selenīta toksicitāte, kas kavē vairuma mikroorganismu augšanu. Tajā pašā laikā Salmonella ģints baktērijas spēj atjaunot šo savienojumu, tādējādi novēršot toksisko iedarbību uz savām šūnām. Taču reakcijas rezultātā veidojas sārms, kas samazina selenīta kaitīgo ietekmi uz pavadošās mikrofloras augšanu, un tāpēc rodas nepieciešamība stabilizēt pH. Šo funkciju veic baktērijas, kas fermentē laktozi, lai iegūtu skābi. Barotnes buferizāciju nodrošina fosfāts.

Divkomponentu buljonā pH stabilizē mannīts. Barotne ar cisteīnu uzlabo selektīvo iedarbību pret salmonellu. Šis buljons ir efektīvs, lai kontrolētu infekcijas fona pacientiem ar neakūtu slimības stadiju vai atveseļošanās periodā.

References celmu augšanas īpašību izpausmes barotnē var novērot pēc 12-24 stundām no inkubācijas sākuma. Šajā gadījumā salmonellas veido bezkrāsainas kolonijas.

Ēdienu gatavošanas iezīmes

Barotnes sagatavošana tiek veikta divos posmos. Vispirms pagatavojiet šķīdumu ar selektīvu komponentu ar ātrumu 4 grami nātrija selenīta uz litru destilēta ūdens. Pēc tam pievienojiet 19 gramus bāzes pulvera (A daļa). Šķīdumu rūpīgi sajauc un karsē, līdz daļiņas pilnībā izšķīst, pēc tam to ielej sterilās mēģenēs.

Gatavojot ēdienu, ir svarīgi uzraudzīt temperatūru, jo vide ir nestabila pret pārkaršanu. Buljonu var sterilizēt tikai ūdens vannā vai izmantojot tvaika plūsmu. Barotnes autoklāvēšana ir stingri aizliegta.

Buljons enterokoku izolēšanai (enterokoku buljons) ir bagātināšanas vide enterokoku izdalīšanai no paraugiem, kas satur daudzas pavadošās mikrofloras. Daudzi mikroorganismi, piemēram, saprofītiskie Neisseria, stafilokoki, hemophilus, nehemolītiskie streptokoki un dažas enterobaktērijas, tiek pilnībā vai daļēji inhibēti.

Kazeīns un sojas peptoni ir mikroorganismu augšanai nepieciešamo barības vielu avoti. Dekstroze ir fermentējams ogļhidrāts, oglekļa un enerģijas avots. Nātrija hlorīds uztur osmotisko līdzsvaru. Nātrija citrāts ir papildu oglekļa avots. Nātrija azīds ir inhibitors. Nātrija sulfīts, reducējot, veido H 2 S. L-cistīns samazina redokspotenciālu, noņemot skābekli, saglabājot zemu Eh vērtību. Kristālviolete ir pH indikators.

Inokulē un inkubē 18-24 stundas 35°C temperatūrā normālā atmosfērā. Enterokoku augšanu nosaka granulu nogulumu veidošanās mēģenes apakšā, un šķidrums virs tā ir bez nogulsnēm vai nedaudz duļķains. Šajā posmā tiek veikta Grama krāsošana un uz asins plāksnēm tiek veikta svītrošana (triptikazeīna sojas agars (kat. Nr. 1068) vai asins agara bāze (kat. Nr. 1108)), lai noteiktu hemolīzes veidu un izolētu tīrkultūras. Lai atšķirtu streptokokus no pneimokokiem, bacitracīna un optohīna diskus novietojiet uz inokulētās zonas uz asins agara plāksnēm un inkubējiet ieteicamos apstākļos 18–24 stundas 35 ± 2 °C temperatūrā.

Veiciet Grama krāsošanu, katalāzes testu un žulti šķīdības testu reprezentatīvām kolonijām, kas ņemtas no asins agara plāksnēm vai buljona kultūras.

Mainīga garuma grampozitīvu koku ķēžu klātbūtne, ko inhibē zema bacitracīna koncentrācija, kas ir negatīva uz katalāzi un nešķīst žulti vai žults sāļos, ir provizoriska A grupas beta-hemolītisko streptokoku identifikācija sasniegts, izmantojot citus bioķīmiskos testus, piemēram, eskulīna hidrolīzi, piruvāta hidrolīzi utt. Turklāt seroloģisko tipizāciju var veikt, izmantojot Lancefield antiseruma metodes vai tradicionālākas Edvarda un Larsona koagulācijas metodes.

Mikrobioloģiskais tests

Šādi rezultāti tika iegūti, izmantojot barotni testa kultūrām pēc inkubācijas 35 ± 2 ° C temperatūrā un novēroti pēc 18–24 stundām.

Mikroorganismi
Escherichia coli ATCC 25922	Inhibēts
Enterococcus faecalis ATCC 19433
Enterococcus faecium ATCC 27270

Bolton selektīvā buljona bāze -

BoltonaSelektīvais bagātināšanas buljons (bāze) mikrobioloģijai

kat. Nr.1.00068.0500

Iepakojums - 500 g

Selektīvs Bolton bagātināšanas buljons noteikšanaiKampilobaktērija

Darbības princips

Bolton Selective Broth satur barības vielas, kas palīdz identificēt pat bojātas kampilobaktēriju šūnas. Mikroaerofilu apstākļu radīšana nav nepieciešama. Selektīvas piedevas ievadīšana barotnē kavē blakus esošās grampozitīvās un gramnegatīvās mikrofloras augšanu.

Sastāvs (g/l)

Gaļas peptons 10,0; laktalbumīna hidrolizāts 5,0; rauga ekstrakts 5,0; nātrija hlorīds 5,0; ketoglutārskābe 1,0; nātrija piruvāts 0,5; nātrija bisulfīts 0,5; nātrija karbonāts 0,6; hemīns 0,01.

Sagatavošana

13,8 g izšķīdina 500 ml destilēta ūdens. Autoklāvā 15 minūtes 121°C un atdzesē līdz 45°C. Pievienojiet aseptiski 25 ml lizētu zirgu asiņu un 1 pudeles selektīvās piedevas saturu Boltona Buljons Selektīvs Papildinājums (kat.N 1.00079.0001) uz Bolton buljonu. Rūpīgi samaisiet un ielejiet buljonu sterilās pudelēs ar skrūvējamiem vāciņiem. Pēc parauga pievienošanas starp skrūvējamo vāciņu un buljona līmeni jābūt apmēram 2 cm atstarpei.