Hemaglutinācijas aizkavēšanās reakcija. Imunoloģiskās metodes. Analīzes laiks

Hemaglutinācijas reakcijas pamatā ir sarkano asins šūnu līmēšanas fenomens, kas notiek dažādu faktoru ietekmē. Ir tieša un netieša hemaglutinācija.

Netiešās hemaglutinācijas reakcijas veikšanas metode sastāv no vairākiem posmiem. Vispirms sarkanās asins šūnas tiek mazgātas ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, pēc tam, ja nepieciešams (izmantojot olbaltumvielu antigēnus), tās apstrādā ar tanīna šķīdumu 1: 20 000 un sensibilizē ar šķīstošiem antigēniem. Pēc mazgāšanas ar buferētu izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu eritrocītu antigēns ir gatavs lietošanai. Testa serumus atšķaida ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu mēģenēs vai īpašās plastmasas plāksnēs ar iedobēm, pēc tam katram seruma atšķaidījumam pievieno eritrocītu diagnostiku. Netiešās hemaglutinācijas reakcijas rezultātus ņem vērā mēģenes apakšā izveidoto sarkano asins šūnu nogulumu raksturs. Reakcijas rezultāts, kurā sarkanās asins šūnas vienmērīgi pārklāj visu mēģenes dibenu, tiek uzskatīts par pozitīvu. Negatīvās reakcijas gadījumā sarkanās asins šūnas neliela diska vai “pogas” veidā atrodas mēģenes dibena centrā.

Galvenās RP sastāvdaļas:

A) šķīstošs antigēns,

B) Specifiskas antivielas (serums)

(RTGA) ir metode vīrusa identificēšanai vai pretvīrusu antivielu noteikšanai pacienta asins serumā, kuras pamatā ir sarkano asins šūnu aglutinācijas neesamība ar vīrusu saturošām zālēm pret to imūna asins seruma klātbūtnē.
Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (HAI) balstās uz blokādi, vīrusu antigēnu nomākšanu ar imūnseruma antivielām, kā rezultātā vīrusi zaudē spēju aglutinēt sarkanās asins šūnas.
RTGA izmanto daudzu vīrusu slimību diagnosticēšanai, kuru izraisītāji (gripas vīrusi, masalas, masaliņas, ērču encefalīts u.c.) var aglutinēt dažādu dzīvnieku sarkanās asins šūnas.
Mehānisms. Vīrusu tipizēšana tiek veikta, izmantojot hemaglutinācijas inhibīcijas reakciju (HAI) ar tipam raksturīgu serumu komplektu. Reakcijas rezultāti tiek ņemti vērā, ja nav hemaglutinācijas. Vīrusa A apakštipus ar antigēniem H 0 N 1, H 1 N 1, H 2 N 2, H 3 N 2 utt. var diferencēt RTGA ar homologu tipam specifisku serumu komplektu.

Pamatā hemaglutinācijas reakcijas slēpjas sarkano asins šūnu adhēzijas fenomens, kas notiek dažādu faktoru ietekmē. Ir tieša un netieša hemaglutinācija.
Tiešā hemaglutinācijas reakcijā sarkanās asins šūnas salīp kopā, kad uz tām tiek adsorbēti noteikti antigēni, piemēram, vīrusi.
Seroloģiskajos pētījumos tiek izmantota tiešā hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija, kad no pacienta izolētais vīruss tiek neitralizēts ar specifisku imūnserumu un pēc tam apvienots ar sarkanajām asins šūnām. Hemaglutinācijas trūkums norāda uz vīrusa un izmantotā imūnseruma konsistenci.

Netiešā hemaglutinācijas reakcija (pasīvā hemaglutinācija) tiek novērota gadījumos, kad imūnserumu vai pacienta serumu, kas satur atbilstošas ​​antivielas, pievieno sarkanajām asins šūnām, kas iepriekš ir apstrādātas (sensibilizētas) ar dažādiem antigēniem. Notiek specifiska sarkano asins šūnu līmēšana, to pasīvā hemaglutinācija.

Netiešā vai pasīvā hemaglutinācijas reakcija ir jutīgāka un specifiskāka par citām seroloģiskajām metodēm, un to izmanto baktēriju, riketsijas un vienšūņu izraisītu infekciju diagnostikā.

Netiešās hemaglutinācijas reakcijas veikšanas metode sastāv no vairākiem posmiem. Vispirms sarkanās asins šūnas tiek mazgātas ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, pēc tam, ja nepieciešams (izmantojot olbaltumvielu antigēnus), tās apstrādā ar tanīna šķīdumu 1: 20 000 un sensibilizē ar šķīstošiem antigēniem. Pēc mazgāšanas ar buferētu izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu eritrocītu antigēns ir gatavs lietošanai. Testa serumus atšķaida ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu mēģenēs vai īpašās plastmasas plāksnēs ar iedobēm, pēc tam katram seruma atšķaidījumam pievieno eritrocītu diagnostiku. Netiešās hemaglutinācijas reakcijas rezultātus ņem vērā mēģenes apakšā izveidoto sarkano asins šūnu nogulumu raksturs. Reakcijas rezultāts, kurā sarkanās asins šūnas vienmērīgi pārklāj visu mēģenes dibenu, tiek uzskatīts par pozitīvu. Negatīvas reakcijas gadījumā sarkanās asins šūnas neliela diska vai “pogas” formā atrodas mēģenes dibena centrā.

Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija - seroloģiskā reakcija, pamatojoties uz antivielu spēju novērst eritrocītu aglutināciju ar hemaglutinējošiem vīrusu veidiem (adenovīrusi, arbovīrusi, daži enterovīrusi, gripas un paragripas vīrusi, masalas, reovīrusi). Specifiskas pretvīrusu antivielas mijiedarbojas ar šo vīrusu virionu virsmas hemaglutinīna molekulām un bloķē to saistīšanos ar eritrocītu membrānas komplementārajām molekulām.

Pēdējā laikā reakciju plaši izmanto klīniskās virusoloģijas laboratorijās, lai noteiktu specifisku antivielu titrus pret noteiktiem vīrusiem, kā arī seroloģiskai identificēšanai un vīrusu izolātu tipizēšanai no pacientu klīniskā materiāla. To lietošana ir nedaudz ierobežota, jo cilvēka asins serumā ir nespecifiski vīrusu inhibitori, kā arī dabiskās antivielas - aglutinīni.

Neitralizācijas reakcija ir hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (HAI).

RTGA tiek izmantots:
-vīrusu serotipēšanai;
- infekciju serodiagnostikai.
Ir divas iestatīšanas metodes:
- pilienu metode uz stikla (aptuvena reakcija), ko izmanto vīrusu serokopēšanai;
- paplašināts mēģenēs.

Mehānisms. Dažiem vīrusiem (piemēram, gripai) ir hemaglutinīns, kas izraisa dažādu dzīvnieku sarkano asins šūnu aglutināciju atkarībā no vīrusa veida. Ja serumā ir antivielas - antihemaglutinīni, tiek novērota vīrusu aktivitātes inhibīcija.
RTGA.
Mērķis: A gripas vīrusa serotipēšana

Sastāvdaļas:
1. Pētāmais materiāls ir vistas embrija alantoīda šķidrums,
2. Diagnostikas pretgripas tipam specifiski serumi,
3. 5% vistas eritrocītu suspensija.
4. Sāls šķīdums.

Reakciju veic uz stikla, izmantojot pilienu metodi. Uzklājiet uz stikla 1 pilienu diagnostikas seruma un testa materiāla, samaisiet, pēc tam pievienojiet 1 pilienu sarkano asins šūnu suspensijas. Ar pozitīvu reakciju tiek novērots viendabīgs apsārtums, un ar negatīvu reakciju izkrīt sarkanas pārslas (hemaglutinācija).

Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (HIR) ir metode vīrusa identificēšanai vai pretvīrusu antivielu noteikšanai pacienta asins serumā, kuras pamatā ir sarkano asins šūnu aglutinācijas neesamība ar vīrusu saturošām zālēm, ja asins serumā ir imūna pret vīrusu. to.

Daudzi vīrusi spēj aglutinēt stingri noteiktu zīdītāju un putnu sugu sarkanās asins šūnas. Tādējādi gripas un cūciņu vīrusi aglutinē vistu, jūrascūciņu un cilvēku eritrocītus, bet adenovīrusi – žurku un peļu eritrocītus. Šajā sakarā, lai tos atklātu pacientu materiālā vai šūnu, embriju un dzīvnieku kultūrās, tiek veikta hemaglutinācijas reakcija (HRA). Lai to izdarītu, plākšņu iedobēs sagatavo divreiz pieaugošus vīrusus saturošu materiālu un šķidrumu atšķaidījumus, pievienojot tiem eritrocītu NaCl suspensijas, kas mazgātas ar izotonisku šķīdumu. Lai kontrolētu spontānu aglutināciju, sarkanās asins šūnas tiek sajauktas ar vienādu tilpumu izotoniskā NaCl šķīduma. Maisījumus inkubē termostatā 37°C temperatūrā vai plkst telpas temperatūra.

Rentgena analīzes rezultāti tiek ņemti vērā pēc eritrocītu aglutinācijas rakstura pēc 30–60 minūtēm, kad tie parasti ir pilnībā nogulsnēti kontrolē. Par pozitīvu reakciju norāda plusi. “++++” – nogulsnes “lietussarga” formā, “+++” – nogulsnes ar lūmeniem, “++” – nogulsnes ar lieliem lūmeniem, “+” – flokulenti nogulumi, ko ieskauj saburzītu eritrocītu zona. , un “–” – tie paši krasi izteikti eritrocītu nogulumi “pogas” veidā kā kontrolē.

Tā kā RGA ir specifiska grupai, tā neļauj noteikt vīrusu sugas. Tos identificē, izmantojot hemaglutinācijas inhibīcijas testu (HIT). Lai to izveidotu, tiek izmantoti labi zināmi imūnās pretvīrusu serumi, kurus izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumā atšķaida divreiz samazinošā koncentrācijā un ielej iedobēs. Katram atšķaidījumam pievieno vienādu daudzumu vīrusu saturoša šķidruma. Kontrole ir vīrusa suspensija izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumā. Plāksnes ar serumu un vīrusa maisījumu tiek turētas termostatā 30 minūtes vai istabas temperatūrā 2 stundas, pēc tam katrai no tām pievieno sarkano asins šūnu suspensiju. Pēc 30 minūtēm nosaka vīrusu neitralizējošā seruma titru (t.i., tā maksimālo atšķaidījumu), kas izraisīja eritrocītu aglutinācijas aizkavēšanos.

RTGA izmanto vīrusu slimību, īpaši gripas un adeno, seroloģiskajā diagnostikā. vīrusu infekcijas. Labāk to lietot tāpat kā RN, ar sapārotiem serumiem. Četrkārtīgs antivielu titra pieaugums otrajā serumā apstiprina iespējamo diagnozi.

Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (HIR) balstās uz bloķēšanu, vīrusu antigēnu nomākšanu ar imūnseruma antivielām, kā rezultātā vīrusi zaudē spēju aglutinēt sarkanās asins šūnas.

RTGA izmanto daudzu vīrusu slimību diagnosticēšanai, kuru izraisītāji (gripas vīrusi, masalas, masaliņas, ērču encefalīts u.c.) var aglutinēt dažādu dzīvnieku sarkanās asins šūnas.

Mehānisms. Vīrusu tipizēšana tiek veikta, izmantojot hemaglutinācijas inhibīcijas reakciju (HAI) ar tipam raksturīgu serumu komplektu. Reakcijas rezultāti tiek ņemti vērā, ja nav hemaglutinācijas. Vīrusa A apakštipus ar antigēniem H 0 N 1, H 1 N 1, H 2 N 2, H 3 N 2 utt. var diferencēt RTGA ar homologu tipam specifisku serumu komplektu.

Pēdējā laikā reakciju plaši izmanto klīniskās virusoloģijas laboratorijās, lai noteiktu specifisku antivielu titrus pret noteiktiem vīrusiem, kā arī seroloģiskai identificēšanai un vīrusu izolātu tipizēšanai no pacientu klīniskā materiāla. To lietošana ir nedaudz ierobežota, jo cilvēka asins serumā ir nespecifiski vīrusu inhibitori, kā arī dabiskās antivielas - aglutinīni.

Hemaglutinācijas reakcija (HRA).

Hemaglutinācija ir sarkano asins šūnu līmēšanas parādība dažādu mikroorganismu iedarbības dēļ.

Hemaglutinācijas mehānisms ir sarkano asins šūnu (dzīvnieku vai cilvēku) līmēšana, uz kuras virsmas adsorbējas mikroorganismi; pēdējie ir tilti, kas savieno blakus esošās sarkanās asins šūnas. Iespējams arī, ka uz eritrocītu virsmas adsorbēti mikroorganismi maina savu lādiņu, kā rezultātā eritrocīti iegūst spēju salipt kopā, nogulsnējot mēģenes vai plāksnes iedobes dibenā ar plānu plēvīti formā. apgriezts lietussargs (pilnīgas hemaglutinācijas attēls).

Attieksme dažādi veidi empīriski tiek konstatēti mikroorganismi, kas izraisa vienas vai citas sugas dzīvnieku (vai personu) eritrocītu aglutināciju. Parasti mikroorganismi, kas veido vienu taksonomisko grupu, aglutinē vienas un tās pašas dzīvnieku sugas eritrocītus. Aglutinēto eritrocītu sugas bieži izmanto, lai norādītu uz mikroorganismiem.

Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (HAI).

Hemaglutinācija ir atgriezenisks process. Mikrobu hemaglutinācijas specifika tiek vērtēta pēc tās inhibīcijas vai nomākšanas ar atbilstošām pretmikrobu antivielām. Šī parādība ir RTGA pamatā. RTHA mehānisms ir tāds, ka pretmikrobu antihemaglutinīni neļauj mikroorganismiem aglutinēt jutīgu dzīvnieku sugu sarkanās asins šūnas.

Atkarībā no RTGA mērķa tās rezultāts ir vai nu izolēta celma identificēšana, kura hemaglutināciju nomāc zināms serums, vai specifisku pretmikrobu antivielu noteikšana testa asins serumā.

4. Komplementa fiksācijas reakcija (CFR) —Šī ir sarežģīta reakcija, kas notiek divās fāzēs. Tās ražošanai ir nepieciešamas šādas sastāvdaļas: antigēns, antiviela, komplements, aitas sarkanās asins šūnas, hemolītiskais imūnserums.

RSC piedalās divas antigēnu-antivielu sistēmas: specifiskā un hemolītiskā. Konkrētā sistēma ir:

a) zināms antigēns (diagnosticum) un pacienta vai šīs infekcijas pārdzīvojušā asins serums (satur šim antigēnam atbilstošas ​​antivielas);

b) vai nezināms antigēns un zināms diagnostikas imūnserums atveseļošanās periodā. Ja antigēns un antiviela ir homologi, tie veido īpašu neredzamu kompleksu, kas absorbē komplementu.

Komplementa adsorbciju uz konkrēta kompleksa var noteikt tikai ar hemolītiskās sistēmas palīdzību, kas sastāv no antigēna (aitas sarkanās asins šūnas) un imūnseruma (tā antiseruma). Sarkano asins šūnu hemolīze hemolītiskajā sistēmā notiek tikai brīva komplementa klātbūtnē.

Ja veidojas konkrēts komplekss, tas adsorbē komplementu. Pievienojot hemolītisko sistēmu, sarkano asins šūnu hemolīze nenotiek ( pozitīvs rezultāts). Ja antigēns un antiviela ir heterologi, komplements ir brīvā formā, jo to atsevišķi nesorbē ne antigēns, ne antiviela. Pievienojot hemolītisko sistēmu, notiek sarkano asins šūnu hemolīze (negatīvs rezultāts).

RSC, tāpat kā visas seroloģiskās reakcijas, ir universāls. To var izmantot vīrusu antigēnu noteikšanai infekcijas materiālā, kā arī antivielu noteikšanai pacientu un atveseļojušos pacientu asins serumā.

5. Pasīvā hemaglutinācijas reakcija (RPHA) vai netiešā hemaglutinācijas reakcija (IRHA), plaši izmanto virusoloģiskajā praksē masalu, elpceļu sincitiālā vīrusa infekcijas, Koksaki B vīrusu izraisītu slimību, ērču encefalīta, trakumsērgas, B hepatīta, adenovīrusu u.c. diagnostikā.

Reakcijas būtība ir tāda, ka sarkanās asins šūnas (visbiežāk cilvēka vai aitas), kas sensibilizētas ar antigēnu (vai antivielu) homologas antivielas (vai antigēna) klātbūtnē, salīp kopā, t.i. dod pasīvās hemaglutinācijas fenomenu.

Tā kā visi antigēni (antivielas) ir labi sorbēti uz eritrocītiem, pēdējie tiek iepriekš apstrādāti ar tanīnu, pēc kura strauji palielinās to spēja sorbēt olbaltumvielas.

Sarkanās asins šūnas, sensibilizētas antigēni , zvanīja eritrocītu diagnostika , sarkanās asins šūnas, sensibilizētas antivielas , zvanīja antivielu diagnostika.

RPGA ir augstāka jutība nekā komplementa fiksācijas un pretimmunoelektroforēzes reakcijām.

Imūnhromatogrāfiskā analīze(ICA) ir metode noteiktas vielu koncentrācijas noteikšanai bioloģiskajā materiālā (urīnā, asinīs, serumā vai plazmā, siekalās, izkārnījumos utt.), un tās pamatā ir reakcija starp antigēnu un tam atbilstošo antivielu. Šī metode analīze tiek veikta, izmantojot indikatoru sloksnes, kociņus, paneļus vai testa kasetes, kas nodrošina testēšanas ātrumu. ICA ir salīdzinoši jauna analītiskā metode, literatūrā to bieži raksturo kā sausās imūnķīmijas metodi, sloksnes testu, QuikStrip kasete, QuikStrip mērstieni, ātro testu vai ātro analīzi. Šie nosaukumi ir saistīti ar šīs analīzes metodes ātrumu.

Imūnhromatogrāfiskā testa darbības princips ir tāds, ka, nolaižot testu fizioloģiskā šķidrumā, tas sāk migrēt pa sloksni saskaņā ar plānslāņa hromatogrāfijas principu. Kustīgā fāze šajā gadījumā ir fizioloģiskais šķidrums. Antivielas un krāsviela pārvietojas kopā ar šķidrumu. Ja pētāmais antigēns (hormons, infekcijas vai vēža marķieris) atrodas šajā šķidrumā, tas ir saistīts gan ar pirmā, gan otrā tipa antivielām, kas jau ir imunoloģiska analīzes metode. Šajā gadījumā antivielas ar krāsvielu uzkrājas ap antivielām, kas ir stingri imobilizētas ICA sloksnes testa zonā, kas parādās kā spilgti tumša josla. Ar krāsvielu nesaistītās antivielas migrē tālāk pa sloksni un mijiedarbojas ar sekundārajām antivielām kontroles zonā, kur parādās otra tumša josla. Mijiedarbība (un tumšā josla) kontroles zonā vienmēr tiks noteikta (ja analīze tiek veikta pareizi), neatkarīgi no testa antigēna klātbūtnes fizioloģiskā šķidrumā. Rezultāti tiek noteikti vizuāli vai datorizēti apstrādājot skenēto attēlu.

P RIF princips pamatojoties uz fluorescējošu antivielu noteikšanu. Adsorbētais antigēns tiek kombinēts ar imūnserumu, pēc tam iegūtais antigēna-antivielu komplekss tiek apstrādāts ar γ-globulīnu, kas apvienots ar fluoresceīna izotiocianātu. Tā kā ar fluorohromu iezīmētās antivielas nezaudē spēju kombinēties ar antigēnu un tādējādi izraisa zāļu mirdzumu zili violetos staros, kuru avots ir dzīvsudraba-kvarca lampa. Šī metode ļauj noteikt diagnozi 2-48 stundu laikā no slimības sākuma. Materiāli pētniecībai var būt uztriepes no nazofarneksa, asinis, cerebrospinālais šķidrums un citi bioloģiskie šķidrumi, kuros var atrasties patogēns.

Lateksa aglutinācijas reakcija ir viens no aglutinācijas reakcijas veidiem, kurā sintētiskās polimēra lateksa daļiņas tiek izmantotas kā antigēna vai antivielu nesējs. Šo reakciju izmanto, lai noteiktu antivielu klātbūtni izmeklēto cilvēku asins serumā un identificētu slimības izraisītāju. Šķīstošie smalkie antigēni baktēriju šūna proteīna vai polisaharīda daba ir adsorbēta uz monodispersa lateksa virsmas. Šādas lateksa daļiņas ar baktēriju antigēniem imūnseruma ietekmē salīp kopā, kas noved pie raksturīgu nogulumu veidošanās - plānas plēves ar nelīdzenām malām. Reakciju novērtē vizuāli (“+” pēc plēves nogulsnēm akas apakšā).

Imunoblotēšana– kvalitatīva metode, kas ļauj ar augstu ticamību noteikt Ag vai At jebkurā organisma bioloģiskajā vidē. Metodes specifika un jutīgums ir 99-100%. Imunoblotēšanas metode ir līdzīga ELISA metodei, taču pētījuma pēdējais posms ietver biopolimēra (Ag vai At) pārvietošanu un imobilizāciju uz porainas membrānas, kur biopolimēru analizē, izmantojot imūnsorbentus. Specifiskuma dēļ imūnblotēšana tiek klasificēta kā atsauces tests (apstiprinošs).

Ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests (ELISA)vai, precīzāk, fermentatīvs imūnsorbcijas tests (eng. ar enzīmu saistītais imūnsorbcijas tests, ELISA) ir imunoloģiska metode noteiktu antigēnu noteikšanai, kuras pamatā ir antigēnu-antivielu kompleksu identificēšana. Plaši izmanto laboratorijas diagnostikā.

Ir vairākas pieejas, kas var noteikt, vai antiviela ir saistījusies ar mērķa antigēnu. Viens no tiem ir ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests (ELISA), ko bieži izmanto, lai diagnosticētu dažādus antigēnus. Analīzes procedūra ietver šādas darbības:

ELISA pamatprincips ir pirmās antivielas specifiska saistīšanās ar mērķi. Ja mērķa molekula ir olbaltumviela, tad tās attīrīto preparātu parasti izmanto, lai iegūtu antivielas, ar kuru palīdzību pēc tam tiek identificēts šis mērķis. Iepriekš pirmās izmantotās antivielas bija poliklonālas. Monoklonālo antivielu izstrāde un izmantošana ir ļāvusi būtiski uzlabot enzīmu imūntestu specifiku.

Enzīmu imūnsorbcijas tests tiek plaši izmantots dažādu slimību diagnosticēšanai infekcijas slimības, onkoloģiskie procesi (galvenokārt specifisku proteīnu un peptīdu dēļ), dažādu zemas molekulmasas savienojumu, piemēram, toksīnu, noteikšana, zāles un tā tālāk.

Šī ir seroloģiska reakcija, kurā specifiskas pretvīrusu antivielas, mijiedarbojoties ar vīrusu (antigēnu), neitralizē to un atņem spēju aglutinēt sarkanās asins šūnas, t.i. kavē hemaglutinācijas reakciju (HRTHA), kas ļauj to izmantot, lai noteiktu HRA laikā atklāto vīrusu veidu un pat veidu.

Piedāvājuma reakcija. 0,25 ml pretvīrusu seruma secīgos divkāršos atšķaidījumos no 1:10 līdz 1:2560 sajauc ar vienādu daudzumu vīrusa saturoša materiāla, kas atšķaidīts 4 reizes mazāk nekā RGA noteiktais titrs. Maisījumu sakrata un ievieto termostatā uz 30 minūtēm, pēc tam pievieno 0,5 ml 1-2% sarkano asins šūnu suspensijas.

Reakciju pavada 3 kontroles.

Rezultātus reģistrē pēc otrās inkubācijas termostatā 30 vai 45 minūtes istabas temperatūrā. Ja eksperiments tiek veikts pareizi, seruma un eritrocītu kontrolē jāizveido “poga” - nav eritrocītus aglutinējoša faktora; antigēnu kontrolē veidojas “lietussargs” - vīruss izraisīja sarkano asins šūnu aglutināciju.

Eksperimentā, ja serums ir homologs pētāmajam vīrusam, veidojas “poga” – serums vīrusu neitralizē. Seruma titrs ir tā maksimālais atšķaidījums, pie kura tiek aizkavēta hemaglutinācija.

Netiešā hemaglutinācijas reakcija

Netiešās (pasīvās) hemaglutinācijas reakcijas (IRHA) pamatā ir fakts, ka sarkanās asins šūnas, ja uz to virsmas tiek adsorbēts šķīstošs antigēns, mijiedarbojoties ar antivielām pret adsorbēto antigēnu, iegūst aglutinācijas spēju. RNGA plaši izmanto vairāku infekciju diagnostikā.

Reakcijas iestatīšana. Testējamo serumu karsē 30 minūtes 56 °C temperatūrā, secīgi atšķaida proporcijā 1:10-1:1280 un ielej 0,25 ml mēģenēs vai iedobēs, kur tiek ievietoti 2 pilieni eritrocītu diagnostikas (eritrocīti ar uz tiem adsorbētu antigēnu). pēc tam pievienoja.

70. att. Pasīvās hemaglutinācijas reakcijas (RPHA) shēma.

A - eritrocītu diagnostikas iegūšana; B -RPGA: 1-eritrocīts: 2 - pētāmais antigēns: 3 - eritrocītu diagnostikas; 4 - antiviela pret pētāmo antigēnu; 5 - aglutināts.

Kontroles: eritrocītu diagnostikas suspensija ar zināmu imūnserumu; diagnostikas apturēšana ar normālu serumu; normālu sarkano asins šūnu suspensija ar testa serumu. Pirmajā kontrolē jānotiek aglutinācijai, otrajā un trešajā tā nedrīkst notikt.

Izmantojot RNGA, jūs varat noteikt nezināmu antigēnu, ja zināmas antivielas ir adsorbētas uz eritrocītiem.

Hemaglutinācijas reakciju var veikt 0,025 ml tilpumā (mikrometode), izmantojot Takachi mikrotitratoru.

NOKĻŪŠU REAKCIJA

Izgulsnēšanas reakcijā tiek izgulsnēts specifisks imūnkomplekss, kas sastāv no šķīstoša antigēna (lizāta, ekstrakta, (apten) un specifiskas antivielas elektrolītu klātbūtnē).

Duļķaino gredzenu vai nogulsnes, kas veidojas šīs reakcijas rezultātā, sauc par nogulsnēm. Šī reakcija no aglutinācijas reakcijas galvenokārt atšķiras ar antigēna daļiņu lielumu.

Nokrišņu reakciju parasti izmanto, lai noteiktu antigēnu vairāku infekciju (sibīrijas mēra, meningīta uc) diagnostikā; tiesu medicīnā - noteikt asiņu, spermas uc sugas; sanitārajos un higiēniskajos pētījumos - konstatējot produktu viltojumu; ar tās palīdzību tiek noteiktas dzīvnieku un augu filoģenētiskās attiecības. Reakcijai jums ir nepieciešams:

1. Antivielas (precipitīni) - imūnserums ar augstu antivielu titru (ne zemāku par 1:100 000). Izgulsnējošā seruma titru nosaka pēc antigēna augstākā atšķaidījuma, ar kuru tas reaģē.
Serumu parasti lieto neatšķaidītu vai atšķaidījumā 1:5-1:10.

2. Antigēns – izšķīdis proteīns vai
lipoīdu polisaharīdu raksturs (pilni antigēni un
haptens).

3. Izotoniskais šķīdums.

Galvenās izgulsnēšanas reakcijas veikšanas metodes ir: gredzenveida izgulsnēšanas reakcija un izgulsnēšanas reakcija agarā (gelā).

Uzmanību! Visām nokrišņu reakcijā iesaistītajām sastāvdaļām jābūt pilnīgi caurspīdīgām.

71. att. Nogulsnēšanas reakcija: A - gredzena izgulsnēšanās reakcija; B - Ouchterlony nokrišņu reakcija

Gredzena nokrišņu reakcija. Izmantojot Pasteur pipeti, nogulsnēšanas mēģenē pievienojiet 0,2–0,3 ml (5–6 pilienus) seruma (serums nedrīkst nokļūt uz mēģenes sieniņām). Antigēns tādā pašā tilpumā tiek rūpīgi uzklāts uz seruma, izlejot to ar plānu Pastēra pipeti gar mēģenes sieniņu. Mēģene tiek turēta slīpā stāvoklī. Ja tas ir pareizi uzklāts, starp serumu un antigēnu jābūt skaidrai robežai. Uzmanīgi, lai šķidrums nesajauktos, mēģeni ievieto statīvā. Ja reakcija ir pozitīva, antigēna un antivielas saskarnes vietā veidojas duļķains “gredzens” - nogulsnes (sk. 48. att.).

Reakcijai ir pievienotas vairākas kontroles (18. tabula). Ļoti svarīga ir reakcijas sastāvdaļu pievienošanas secība mēģenē. Jūs nevarat uzklāt serumu uz antigēna (kontrolē - uz izotoniskā šķīduma), jo seruma relatīvais blīvums ir lielāks, tas nogrims mēģenes apakšā, un robeža starp šķidrumiem netiks atklāta.

Shēma gredzena izgulsnēšanas reakcijas iestatīšanai

Tabula Nr.13

Piezīme. + “gredzena” klātbūtne; - “gredzena” trūkums.

Rezultāti tiek reģistrēti pēc 5-30 minūtēm, dažos gadījumos pēc stundas, kā vienmēr, sākot ar vadīklām. “Gredzens” 2. mēģenē norāda uz imūnseruma spēju uzsākt specifisku reakciju ar atbilstošo antigēnu. 3-5 mēģenēs nedrīkst būt “gredzenu” - nav viens otram atbilstošu antivielu un antigēnu. "Gredzens" 1. mēģenē - pozitīvs reakcijas rezultāts - norāda, ka testa antigēns atbilst ņemtajam imūnserumam, "gredzena" neesamība ("gredzens" tikai 2. mēģenē) norāda uz to neatbilstību - negatīvu reakciju. rezultāts.

Izgulsnēšanās reakcija agarā (gelā). Reakcijas īpatnība ir tāda, ka antigēna un antivielu mijiedarbība notiek blīvā vidē, t.i., gēlā. Iegūtās nogulsnes barotnes biezumā rada duļķainu svītru. Joslas trūkums norāda uz neatbilstību starp reakcijas komponentiem. Šo reakciju plaši izmanto biomedicīnas pētījumos, jo īpaši pētot toksīnu veidošanos difterijas izraisītājā.

Izpētīt antigēna un antivielu mijiedarbības raksturu reakcijā
nokrišņi agarā, ieskicējiet rezultātu (saņemiet tasi no skolotāja).

Hemaglutinācijas reakcijas kavēšana

serols. reakcijas, kuru pamatā ir eritrocītu aglutinācijas inhibīcija. Tiek izmantoti divi hemaglutinācijas veidi: aktīvās (RTHA) un pasīvās (RPHA) hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija. RTGA izmanto vīrusu infekciju serodiagnostikai un nezināmu vīrusu tipizēšanai. Pirmajā versijā uz dubulto atšķaidījumu sēriju s-k-b-nogo uzņemts slimības sākumā un pēc 10-14 dienām 0,25 ml tilpumā pievieno 0,25 ml standarta vīrusu diagnostikas. Pēc stundu ilgas iedarbības istabas temperatūrā katrā mēģenē (iedobē) pievieno 0,5 ml 1% vistas eritrocītu suspensijas. Pēc 30 - 60 minūtēm abās rindās tiek noteikti pēdējie vaislas s-k, kurā tika konstatēta hemaglutinācijas inhibīcija (neesamība). Ja Ab titrs palielinās 4 un vairāk reizes, tiek sniegta pozitīva atbilde, citos gadījumos - negatīva atbilde. Vīrusu tipizēšanai sagatavo standarta standarta testa divkāršu atšķaidījumu sēriju 0,25 ml tilpumā; katram atšķaidījumam pievieno vienādu testa tilpumu. vīrusu suspensija ar 4 hemaglutinācijas vienību aktivitāti. (deva), 1 stundu patur istabas temperatūrā un pievieno 0,5 ml 1% vistas eritrocītu suspensijas. Grāmatvedība tiek veikta tāpat kā iepriekšējā versijā. Vīruss tiek atzīts par identisku vīrusam, ja RTHA sasniedz standarta vīrusa titru vai 1/2 titru. Papildus šai un citām opcijām tiek ievietotas 3 vadīklas: s-ki, vīruss, eritrocīti. RTPGA parasti veic baktēriju, sēnīšu, vienšūņu Ag (haptēnu) noteikšanai pētījumos. materiāls. Tas ir ļoti jutīgs, specifisks, bet darbietilpīgs izpildei. RTPGA arī tiek veikta 2 posmos. 1. posmā, uz virkni dubulto atšķaidījumu, pētījumi. Ag materiālam pievieno vienādu (parasti 0,25 ml) standarta imūnsistēmas tilpumu, kas uzņemts darba devā. Mēģenes tiek turētas termostatā 2 stundas.Atbilstošā Ag klātbūtnē materiālā notiek Ab saistīšanās un ar sekojošu eritrocītu diagnostikas pievienošanu vairākās mēģenēs (un atkarībā no Ag daudzuma) , tiek kavēta sensibilizēto eritrocītu aglutinācija. Eksperimentu papildina šūnu, eritrocītu un materiāla kontroles.

(Avots: Mikrobioloģijas terminu vārdnīca)

• - Ag aglutinācijas inhibēšana ar homologiem Abs, kas radušās iepriekšējas Abs saskares rezultātā ar testa Ag, parasti ar haptēnu raksturu.Pamatojoties uz Ag konkurenci par Ags paratopu...

  Mikrobioloģijas vārdnīca

• - sarkano asins šūnu līmēšanas process ar vīrusu suspensiju. Izmanto, lai norādītu uz vīrusiem vidē...

  Mikrobioloģijas vārdnīca

• - 1) ar svešiem Ag vai hapteniem homologiem sensibilizētu eritrocītu līmēšanas process...

  Mikrobioloģijas vārdnīca

• - daļa no dzinuma, no kuras pumpuriem neveidojas sānu dzinumi...

  Augu anatomija un morfoloģija

• - ...

  Tehnoloģiju enciklopēdija

• - izentropiski inhibētas gāzes temperatūra T0. Spēlē svarīgu lomu ideālas ideālas gāzes kustībā...

  Tehnoloģiju enciklopēdija

• - izentropiski stagnējošas gāzes parametri: stagnācijas blīvums 0, stagnācijas temperatūra T0, kopējais spiediens p0, stagnācijas entalpija H. Tiem ir svarīga loma ideālas gāzes kustībā un...

  Tehnoloģiju enciklopēdija

• - viena no ātrgaitas gāzes plūsmas īpašībām, kas vienāda ar šīs gāzes temperatūru, izentropiski palēnināta līdz nulles ātrumam...

  Lielā enciklopēdiskā politehniskā vārdnīca

• - pretvēža zāļu efektivitātes rādītājs, ko aprēķina kā audzēju vidējās masas attiecību dzīvnieku kontroles grupā eksperimenta beigās pret vidējo audzēju masu ārstēto dzīvnieku grupā...

  Liela medicīniskā vārdnīca

• - noteiktas neironu grupas iepriekš apstarotās inhibīcijas ierobežojums...

  Liela medicīniskā vārdnīca

• - vīrusu noteikšanas un identificēšanas metode, kuras pamatā ir dažu vīrusu spēja selektīvi aglutinēt noteikta veida dzīvnieku sarkanās asins šūnas...

  Liela medicīniskā vārdnīca

• - metode antigēnu vai antivielu noteikšanai un identificēšanai, kuras pamatā ir sarkano asinsķermenīšu aglutinācijas parādība, kas notiek to klātbūtnē, uz kuras virsmas atrodas atbilstošais ...

  Liela medicīniskā vārdnīca

• - skatiet Netiešā hemaglutinācijas reakcija...

  Liela medicīniskā vārdnīca

• - metode vīrusa identificēšanai vai pretvīrusu antivielu noteikšanai pacienta asins serumā, kuras pamatā ir sarkano asins šūnu aglutinācijas neesamība ar vīrusu saturošām zālēm imūnsistēmas klātbūtnē...

  Liela medicīniskā vārdnīca

• - metode šūnu imunitātes vai aizkavēta tipa sensibilizācijas novērtēšanai, ko izmanto, lai identificētu nespecifisku aktivēto limfocītu radīto faktoru, kas nomāc makrofāgu migrāciju zem...

  Liela medicīniskā vārdnīca

• - "...Gludās bremzēšanas uztvērēji ir drošības uztvērēji, kas satur elastīgu elementu, kura deformācija nosaka spēka lielumu, kas iedarbojas uz bremzēšanas elementu..." Avots: Krievijas Federācijas Gosgortekhnadzor 16. maija rezolūcija. .

  Oficiālā terminoloģija

"Hemaglutinācijas reakcijas kavēšana" grāmatās

Daži bremzēšanas veidi