Reacția de întârziere a hemaglutinarii. metode imunologice. Timp de analiză

La baza reacției de hemaglutinare se află fenomenul de aglutinare a eritrocitelor, care are loc sub influența diverșilor factori. Se face distincția între hemaglutinarea directă și cea indirectă.

Metoda de stabilire a reacției de hemaglutinare indirectă constă în mai multe etape. Mai întâi, eritrocitele sunt spălate cu o soluție izotonă de clorură de sodiu, apoi, dacă este necesar (când se folosesc antigeni de natură proteică), sunt tratate cu o soluție de tanin 1: 20.000 și sensibilizate cu antigene solubile. După spălare cu o soluție tamponată de clorură de sodiu izotonică, antigenul eritrocitar este gata de utilizare. Serurile de testat se diluează cu soluție izotonică de clorură de sodiu în eprubete sau plăci speciale din plastic cu orificii, apoi se adaugă câte un diagnostic de eritrocite la fiecare diluție de ser. Rezultatele reacției indirecte de hemaglutinare sunt luate în considerare de natura sedimentului eritrocitar format la fundul tubului. Rezultatul reacției este considerat pozitiv, în care eritrocitele acoperă uniform întregul fund al eprubetei. Cu o reacție negativă, celulele roșii din sânge sub forma unui disc mic sau „buton” sunt situate în centrul fundului eprubetei.

Principalele componente ale RP:

A) antigenul solubil

B) Anticorpi specifici (ser)

(RTGA) - o metodă pentru identificarea unui virus sau detectarea anticorpilor antivirali în serul sanguin al pacientului, bazată pe fenomenul absenței aglutinarii eritrocitelor cu un medicament care conține un virus în prezența serului sanguin imun la acesta.
Reacția de inhibare a hemaglutinării (HITA) pe baza blocării, suprimarea antigenelor virușilor de către anticorpii serului imunitar, drept urmare virușii își pierd capacitatea de a aglutina globulele roșii.
RTHA este utilizat pentru a diagnostica multe boli virale, ai căror agenți cauzali (gripa, rujeola, rubeola, encefalita transmisă de căpușe etc.) pot aglutina eritrocitele diferitelor animale.
Mecanism. Tiparea virusului se realizează în testul de inhibare a hemaglutinării (HITA) cu un set de seruri specifice tipului. Rezultatele reacției sunt luate în considerare de absența hemaglutinării. Subtipurile de virus A cu antigene H 0 N 1 , H 1 N 1 , H 2 N 2 , H 3 N 2 şi altele pot fi diferenţiate în RTGA cu un set de seruri omoloage specifice tipului.

In nucleu reacții de hemaglutinare constă în fenomenul de aglutinare a eritrocitelor, care apare sub influența diverșilor factori. Se face distincția între hemaglutinarea directă și cea indirectă.
În reacția de hemaglutinare directă, eritrocitele se lipesc împreună atunci când anumiți antigeni, cum ar fi virușii, sunt adsorbiți pe ele.
În studiile serologice, se utilizează reacția de inhibare directă a hemaglutinării, atunci când virusul izolat de la pacient este neutralizat cu un ser imun specific și apoi combinat cu globule roșii. Absența hemaglutinării indică corespondența virusului și serul imunitar utilizat.

Reacția de hemaglutinare indirectă (hemaglutinare pasivă) se observă atunci când eritrocitele pretratate (sensibilizate) cu diverși antigeni sunt suplimentate cu ser imunitar sau ser pacient care are anticorpii corespunzători. Există o legătură specifică a eritrocitelor, hemaglutinarea lor pasivă.

Reacția de hemaglutinare indirectă sau pasivă este superioară ca sensibilitate și specificitate față de alte metode serologice și este utilizată în diagnosticul infecțiilor cauzate de bacterii, rickettsiae și protozoare.

Metoda de stabilire a reacției de hemaglutinare indirectă constă în mai multe etape. Mai întâi, eritrocitele sunt spălate cu o soluție izotonă de clorură de sodiu, apoi, dacă este necesar (când se folosesc antigeni de natură proteică), sunt tratate cu o soluție de tanin 1: 20.000 și sensibilizate cu antigene solubile. După spălare cu o soluție tamponată de clorură de sodiu izotonică, antigenul eritrocitar este gata de utilizare. Serurile de testat se diluează cu soluție izotonică de clorură de sodiu în eprubete sau plăci speciale din plastic cu orificii, apoi se adaugă un diagnostic de eritrocite la fiecare diluție de ser. Rezultatele reacției indirecte de hemaglutinare sunt luate în considerare de natura sedimentului eritrocitar format la fundul tubului. Rezultatul reacției este considerat pozitiv, în care eritrocitele acoperă uniform întregul fund al eprubetei. Cu o reacție negativă, eritrocitele sub forma unui disc mic sau „buton” sunt situate în centrul fundului eprubetei.

Reacția de inhibare a hemaglutinării- o reactie serologica bazata pe capacitatea anticorpilor de a preveni aglutinarea eritrocitara prin tipuri de virusuri hemaglutinante (adenovirusuri, arbovirusuri, unele enterovirusuri, virusuri gripale si paragripale, rujeola, reovirusuri). Anticorpii antivirali specifici interacționează cu moleculele de suprafață ale hemaglutininelor virionilor acestor virusuri și blochează legarea acestora de moleculele complementare ale membranei eritrocitelor.

Recent, reacția a fost utilizată pe scară largă în laboratoarele de virologie clinică pentru a determina titrurile de anticorpi specifici anumitor virusuri, precum și pentru identificarea serologică și tiparea izolaților de virus din materialul clinic de la pacienți. Utilizarea este oarecum limitată din cauza prezenței în serul sanguin al oamenilor a inhibitorilor nespecifici ai virusurilor, precum și a anticorpilor naturali - aglutininele.

Reacție de neutralizare - reacție de inhibiție a hemaglutinării (RTGA).

Se aplică RTGA:
-pentru serotiparea virusului;
- pentru serodiagnosticul infecţiilor.
Există două moduri de setare:
- metoda prin picurare pe sticlă (reacție aproximativă), utilizată pentru serocopiarea virusurilor;
- desfasurat in eprubete.

Mecanism. Unele virusuri (de exemplu, gripa) au hemaglutinină, care provoacă aglutinarea eritrocitelor diferitelor animale, în funcție de tipul de virus. În prezența anticorpilor în ser - antihemaglutinin, se observă inhibarea activității virusurilor.
RTGA.
Scop: serotiparea virusului gripal A

Componente:
1. Materialul studiat este lichidul alantoic al embrionului de pui,
2. Seruri de diagnosticare specifice tipului antigripal,
3. 5% suspensie de eritrocite de pui.
4. Soluție salină.

Reacția este plasată pe sticlă prin metoda picăturii. Aplicați 1 picătură de ser de diagnostic și material de testat pe pahar, amestecați, apoi adăugați 1 picătură de suspensie de eritrocite. Cu o reacție pozitivă se observă roșeață omogenă, iar cu o reacție negativă apar fulgi roșii (hemaglutinare).

Testul de inhibare a hemaglutinării (HITA) este o metodă de identificare a unui virus sau de detectare a anticorpilor antivirali în serul sanguin al pacientului, bazată pe fenomenul absenței aglutinării eritrocitelor de către un medicament care conține un virus în prezența serului sanguin imun la acesta.

Mulți virusuri au capacitatea de a aglutina eritrocitele unor specii strict definite de mamifere și păsări. Astfel, virusurile gripei și oreionului aglutinează eritrocitele de pui, porcușori de Guineea, umane și adenovirusuri - eritrocite de șobolani, șoareci. În acest sens, pentru depistarea lor în materialul pacienților sau culturilor celulare, embrionilor și animalelor se efectuează un test de hemaglutinare (RHA). Pentru a face acest lucru, în godeurile plăcilor se prepară diluții dublu crescătoare de materiale și lichide care conțin virusuri, adăugându-le suspensii de eritrocite spălate cu o soluție izotonă de NaCl. Pentru a controla aglutinarea spontană, eritrocitele sunt amestecate cu un volum egal de soluție izotonică de NaCl. Amestecuri sunt incubate într-un termostat la o temperatură de 37°C sau la temperatura camerei.

Rezultatele RHA sunt luate în considerare de natura aglutinarii eritrocitelor după 30-60 de minute, când acestea sunt de obicei depuse complet în control. O reacție pozitivă este indicată de plusuri. „++++” este un sediment în formă de umbrelă, „+++” este un sediment cu goluri, „++” este un sediment cu goluri mari, „+” este un sediment floculent înconjurat de o zonă de eritrocite aglomerate, și „–” – același sediment eritrocitar bine definit sub forma unui „buton” ca și în control.

Fiind specific grupului, RGA nu face posibilă determinarea speciilor de virusuri. Acestea sunt identificate cu ajutorul testului de inhibare a hemaglutinării (HITA). Pentru formularea sa, se folosesc seruri antivirale imune cunoscute, care sunt diluate în soluție izotonică de clorură de sodiu într-o concentrație descrescătoare de două ori și turnate în godeuri. La fiecare diluție se adaugă o cantitate egală de lichid care conține virusuri. Martorul este o suspensie a virusului în soluție izotonică de clorură de sodiu. Tabletele cu un amestec de seruri și virus se țin într-un termostat timp de 30 de minute sau la temperatura camerei timp de 2 ore, apoi se adaugă o suspensie de eritrocite la fiecare dintre ele. După 30 de minute, se determină titrul serului de neutralizare a virusului (adică diluția sa maximă), ceea ce a provocat o întârziere a aglutinarii eritrocitelor.

RTHA este utilizat în diagnosticul serologic al bolilor virale, în special gripa și adeno infecții virale. Este mai bine să-l puneți la fel ca și pH-ul, cu seruri pereche. O creștere de patru ori a titrului de anticorpi în al doilea ser confirmă diagnosticul propus.

Reacția de inhibare a hemaglutinării (RTGA) se bazează pe blocarea, suprimarea antigenelor virale de către anticorpii serici imunitari, în urma căreia virusurile își pierd capacitatea de a aglutina globulele roșii.

RTHA este utilizat pentru a diagnostica multe boli virale, ai căror agenți cauzali (gripa, rujeola, rubeola, encefalita transmisă de căpușe etc.) pot aglutina eritrocitele diferitelor animale.

Mecanism. Tiparea virusului se realizează în testul de inhibare a hemaglutinării (HITA) cu un set de seruri specifice tipului. Rezultatele reacției sunt luate în considerare de absența hemaglutinării. Subtipurile de virus A cu antigene H 0 N 1 , H 1 N 1 , H 2 N 2 , H 3 N 2 şi altele pot fi diferenţiate în RTGA cu un set de seruri omoloage specifice tipului.

Recent, reacția a fost utilizată pe scară largă în laboratoarele de virologie clinică pentru a determina titrurile de anticorpi specifici anumitor virusuri, precum și pentru identificarea serologică și tiparea izolaților de virus din materialul clinic de la pacienți. Utilizarea este oarecum limitată din cauza prezenței în serul sanguin al oamenilor a inhibitorilor nespecifici ai virusurilor, precum și a anticorpilor naturali - aglutininele.

Reacția de hemaglutinare (RGA).

Hemaglutinarea este un fenomen de lipire a celulelor roșii din sânge din cauza expunerii la diferite microorganisme.

Mecanismul hemaglutinării este lipirea eritrocitelor (animale sau oameni), pe suprafața cărora sunt adsorbite microorganisme; acestea din urmă sunt punți de legătură cu eritrocitele învecinate. De asemenea, este posibil ca microorganismele adsorbite pe suprafața eritrocitelor să-și schimbe încărcătura, în urma căreia eritrocitele dobândesc capacitatea de a se lipi între ele, așezându-se pe fundul eprubetei sau al godeurilor plăcii cu o peliculă subțire sub formă de inversat. umbrelă (o imagine a hemaglutinării complete).

Atitudine tipuri diferite microorganisme la aglutinarea eritrocitelor animalelor dintr-o specie sau alta (sau umane) se stabilește empiric. De regulă, microorganismele care alcătuiesc același grup taxonomic aglutinează eritrocitele aceleiași specii de animale. Specia de eritrocite aglutinate este adesea folosită pentru a indica microorganisme.

Reacția de inhibare a hemaglutinării (RTGA).

Hemaglutinarea este un proces reversibil. Specificitatea hemaglutinării microbiene este judecată după efectul de inhibare sau suprimare a anticorpilor antimicrobieni corespunzători. Acest fenomen stă la baza RTGA. Mecanismul HTGA este că antihemaglutininele antimicrobiene împiedică microorganismele să aglutine eritrocitele speciilor de animale sensibile.

În funcție de scopul RTGA, rezultatul său este fie identificarea unei tulpini izolate, a cărei hemaglutinare a fost suprimată de un ser cunoscut, fie detectarea anticorpilor antimicrobieni specifici în serul sanguin studiat.

4. Reacția de fixare a complementului (RSK) - aceasta este reacție complexă care se desfăşoară în două faze. Pentru fixarea acestuia sunt necesare următoarele ingrediente: antigen, anticorp, complement, eritrocite de oaie, ser imun hemolitic.

Două sisteme antigen-anticorp iau parte la RSK: specific și hemolitic. Sistemul specific este:

a) un antigen cunoscut (diagnosticum) și ser sanguin al unui pacient sau al unei persoane care a avut această infecție (conținând anticorpi corespunzători acestui antigen);

b) fie un antigen necunoscut și un ser imunitar diagnostic cunoscut al unui convalescent. Dacă antigenul și anticorpul sunt omoloage, ele formează un complex invizibil specific care absoarbe complementul pe sine.

Adsorbția complementului pe un complex specific poate fi detectată numai folosind un sistem hemolitic, care constă dintr-un antigen (eritrocite de berbec) și ser imunitar (antiser la acesta). Hemoliza eritrocitelor în sistemul hemolitic are loc numai în prezența complementului liber.

În cazul formării unui complex specific, acesta adsorb complementul. Odată cu adăugarea unui sistem hemolitic, nu are loc hemoliza eritrocitelor ( rezultat pozitiv). Dacă antigenul și anticorpul sunt heteroloage, complementul este într-o formă liberă, deoarece nu este absorbit separat nici de antigen, nici de anticorp. Când se adaugă sistemul hemolitic, are loc hemoliza eritrocitară (rezultat negativ).

RSK, ca toate reacțiile serologice, este universală. Poate fi folosit pentru a detecta antigenele virale din materialul infecțios, precum și pentru a detecta anticorpi în serul sanguin al pacienților și al pacienților recuperați.

5. Reacția de hemaglutinare pasivă (RPHA) sau hemaglutinare indirectă (RNGA), este utilizat pe scară largă în practica virologică în diagnosticul rujeolei, infecției cu virus respirator sincițial, bolilor cauzate de virusurile Coxsackie B, encefalită transmisă de căpușe, rabie, hepatită B, adenovirusuri etc.

Esența reacției este că eritrocitele (cel mai adesea umane sau ovine), sensibilizate de un antigen (sau anticorp) în prezența unui anticorp (sau antigen) omolog, se lipesc între ele, de exemplu. dau fenomenul de hemaglutinare pasiva.

Deoarece toți antigenii (anticorpii) sunt bine adsorbiți pe eritrocite, acestea din urmă sunt pre-tratate cu tanin, după care capacitatea lor de a adsorbi proteinele crește brusc.

Eritrocite, sensibilizate antigene , numit diagnosticul eritrocitar , eritrocite, sensibilizate anticorpi , numit diagnosticarea anticorpilor.

RPHA este mai sensibil decât fixarea complementului și contrar imunoelectroforeza.

Analiza imunocromatografică(ICA) este o metodă de determinare a prezenței anumitor concentrații de substanțe în materialul biologic (urină, sânge integral, ser sau plasmă sanguină, saliva, fecale etc.) și se bazează pe reacția dintre un antigen și anticorpul corespunzător acestuia. Aceasta metoda analiza se efectuează folosind benzi indicatoare, bastoane, panouri sau casete de testare, care asigură viteza testării. ICA este o metodă de analiză relativ tânără, este descrisă adesea în literatură și ca metodă de imunochimie uscată, test pe bandă, casetă QuikStrip, jopă QuikStrip, test rapid sau analiză rapidă. Aceste nume sunt asociate cu viteza acestei metode de analiză.

Principiul de funcționare al testului imunocromatografic este că atunci când testul este coborât în ​​fluid fiziologic, acesta începe să migreze de-a lungul benzii conform principiului cromatografiei în strat subțire. Faza de conducere în acest caz este fluidul fiziologic. Anticorpii cu colorant se mișcă, de asemenea, împreună cu lichidul. Dacă antigenul studiat (hormon, marker infecțios sau oncologic) este prezent în acest lichid, acesta este legat atât de primul cât și de al doilea tip de anticorpi, care este deja o metodă imunologică de analiză. În acest caz, se realizează acumularea de anticorpi cu colorantul în jurul anticorpilor, imobilizat rigid în zona de testare a benzii ICA, care se manifestă ca o bandă întunecată strălucitoare. Anticorpii nelegați cu colorant migrează mai departe de-a lungul benzii și interacționează cu anticorpi minori din zona de control, unde apare a doua bandă întunecată. O interacțiune (și o linie întunecată) în zona de control va fi întotdeauna detectată (dacă analiza este efectuată corect), indiferent de prezența antigenului de testat în fluidul fiziologic. Rezultatele sunt determinate vizual sau prin prelucrarea computerizată a imaginii scanate.

P Principiul RIF pe baza determinarii anticorpilor fluorescenti. Antigenul adsorbit este combinat cu serul imun, după care complexul antigen-anticorp format este tratat cu y-globulină combinată cu izotiocianat de fluoriscină. Deoarece anticorpii marcați cu fluorocrom nu își pierd capacitatea de a se lega de antigen și, prin urmare, fac ca preparatele să strălucească în raze albastru-violete, a căror sursă este o lampă cu mercur-cuarț. Această metodă face posibilă stabilirea unui diagnostic în 2-48 de ore de la debutul bolii. Materialele pentru studiu pot fi tampoane din nazofaringe, sânge, fluid cerebrospinalși alte fluide biologice în care poate fi localizat agentul patogen.

reacția de aglutinare a latexului este unul dintre tipurile de reacție de aglutinare în care particulele de latex polimer sintetic sunt utilizate ca purtător al unui antigen sau anticorp. Această reacție este utilizată pentru a detecta prezența anticorpilor în serul persoanelor examinate, pentru a identifica agentul cauzal al bolii. Antigenele fine solubile ale unei celule bacteriene de natură proteică sau polizaharidă sunt adsorbite pe suprafața unui latex monodispers. Astfel de particule de latex cu antigene bacteriene se lipesc împreună sub acțiunea serului imunitar, ceea ce duce la formarea unui precipitat caracteristic - o peliculă subțire cu margini neuniforme. Reacția este evaluată vizual („+” prin sedimentul filmului de la fundul puțului).

Imunoblotting- o metodă calitativă care vă permite să determinați Ag sau At cu o fiabilitate ridicată în orice mediu biologic al organismului. Specificitatea și sensibilitatea metodei este de 99-100%. Metoda de imunoblot este similară cu ELISA, dar etapa finală a studiului este transferul și imobilizarea biopolimerului (Ag sau At) pe o membrană poroasă, unde biopolimerul este analizat folosind imunosorbanți. Imunoblotting datorită specificității sale se referă la testele de referință (confirmatoare).

Imunotestul enzimatic (ELISA)sau, mai precis, enzimatic test imunosorbent (English enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA) este o metodă imunologică pentru detectarea anumitor antigene, bazată pe identificarea complexelor antigen-anticorp. Folosit pe scară largă în diagnosticul de laborator.

Există o serie de abordări care vă permit să determinați dacă legarea unui anticorp la un antigen țintă a avut loc. Unul dintre acestea este un test imunosorbent legat de enzime (ELISA), care este adesea folosit pentru a diagnostica o varietate de antigene. Procedura de analiză include următorii pași:

Principiul de bază al ELISA este legarea specifică a primului anticorp la țintă. Dacă molecula țintă este o proteină, atunci preparatul ei purificat este de obicei folosit pentru a obține anticorpi, cu ajutorul cărora este apoi detectată această țintă. Anterior, au fost utilizați primii anticorpi, care erau de natură policlonală. Dezvoltarea și utilizarea anticorpilor monoclonali au făcut posibilă îmbunătățirea semnificativă a specificității imunotestului enzimatic.

Testul imunosorbent enzimatic este utilizat pe scară largă pentru a diagnostica o varietate de boli infecțioase, oncoprocese (în principal datorită proteinelor și peptidelor specifice), determinarea diferiților compuși cu greutate moleculară mică, cum ar fi toxine, medicamente etc.

Aceasta este o reacție serologică în care anticorpii antivirali specifici, interacționând cu virusul (antigenul), îl neutralizează și îl privează de capacitatea de a aglutina globulele roșii, adică. inhibarea reacției de hemaglutinare (RTGA) vă permite să o utilizați pentru a determina tipul și chiar tipul de viruși detectați în timpul stadializării RHA.

Furnizare de reacție. Se amestecă 0,25 ml de ser antiviral în diluții consecutive de două ori de la 1:10 la 1:2560 cu un volum egal de material care conține virusul, diluat de 4 ori mai puțin decât titrul stabilit în RGA. Amestecul se agită și se pune într-un termostat timp de 30 de minute, după care se adaugă 0,5 ml dintr-o suspensie 1-2% de eritrocite.

Reacția este urmată de 3 controale.

Rezultatele sunt înregistrate după a doua incubare într-un termostat timp de 30 sau 45 de minute la temperatura camerei. Odată cu setarea corectă a experimentului în controlul serului și al eritrocitelor, ar trebui să se formeze un „buton” - nu există niciun factor de aglutinare a eritrocitelor; în controlul antigenului, se formează o „umbrelă” - virusul a provocat aglutinarea eritrocitelor.

În experiment, dacă serul este omologul virusului studiat, se formează un „buton” - serul a neutralizat virusul. Titrul seric este diluția sa maximă în care hemaglutinarea este întârziată.

Reacție indirectă de hemaglutinare

Reacția de hemaglutinare indirectă (pasivă) (RIHA) se bazează pe faptul că eritrocitele, dacă pe suprafața lor este adsorbit un antigen solubil, dobândesc capacitatea de a aglutina atunci când interacționează cu anticorpii la antigenul adsorbit. RNHA este utilizat pe scară largă în diagnosticul unui număr de infecții.

Setarea reacției. Serul de testat este încălzit timp de 30 de minute la 56 ° C, diluat secvenţial în raport de 1:10-1:1280 şi turnat în eprubete sau godeuri în 0,25 ml, unde apoi se adaugă 2 picături de eritrocite diagnosticum (eritrocite cu antigen adsorbite pe ele).

Fig.70 Schema reacției de hemaglutinare pasivă (RPHA).

A - obţinerea unui diagnostic eritrocitar; B - RPGA: 1-eritrocitar: 2 - antigen studiat: 3 - eritrocite diagnosticum; 4 - anticorp la antigenul studiat; 5 - aglutina.

Martori: o suspensie de diagnostic eritrocitar cu ser evident imunitar; suspendarea diagnosticului cu ser normal; o suspensie de eritrocite normale cu serul testat. La primul control ar trebui să apară aglutinarea, la al doilea și al treilea nu ar trebui să fie.

Cu ajutorul RNHA, un antigen necunoscut poate fi determinat dacă anticorpii cunoscuți sunt adsorbiți pe eritrocite.

Reacția de hemaglutinare poate fi setată într-un volum de 0,025 ml (micrometodă) folosind un microtitru Takachi.

REACȚIA PRECIPITAȚIILOR

În reacția de precipitare, se precipită un complex imun specific, constând dintr-un antigen solubil (lizat, extract, (apten) și un anticorp specific în prezența electroliților.

Inelul tulbure sau precipitatul format ca urmare a acestei reacții se numește precipitat. Această reacție diferă de reacția de aglutinare în principal prin dimensiunea particulelor de antigen.

Reacția de precipitare este utilizată de obicei pentru determinarea antigenului în diagnosticul unui număr de infecții (antrax, meningită etc.); în medicina legală - pentru a determina speciile de sânge, spermatozoizi etc.; în studii sanitare și igienice - la stabilirea falsificării produselor; cu ajutorul ei determină relația filogenetică dintre animale și plante. Pentru reacție aveți nevoie de:

1. Anticorpi (precipitine) - ser imunitar cu un titru ridicat de anticorpi (nu mai mic de 1:100.000). Titrul serului precipitat este determinat de cea mai mare diluție a antigenului cu care reacționează.
Serul este folosit de obicei nediluat sau diluat 1:5-1:10.

2. Antigen - substanțe dizolvate ale unei proteine ​​sau
natura polizaharidei lipoide (antigene complete și
haptene).

3. Soluție izotonică.

Principalele metode de realizare a reacției de precipitare sunt: ​​reacția de precipitare în ciclu și reacția de precipitare în agar (gel).

Atenţie! Toate componentele implicate în reacția de precipitare trebuie să fie complet transparente.

Fig.71 Reacția de precipitare: A - reacția de precipitare a inelului; B - Reacția de precipitare Ouchterlony

Reacția de precipitare inelară. În tubul de precipitare se adaugă 0,2 - 0,3 ml (5-6 picături) de ser cu ajutorul unei pipete Pasteur (serul nu trebuie să cadă pe pereții tubului). Antigenul este stratificat cu grijă pe ser în același volum, turnându-l cu o pipetă Pasteur subțire de-a lungul peretelui eprubetei. Eprubeta este ținută în poziție înclinată. Cu o stratificare adecvată, trebuie să se obțină o limită clară între ser și antigen. Cu grijă, pentru a nu amesteca lichidul, puneți eprubeta într-un trepied. Cu un rezultat pozitiv al reacției, se formează un „inel” tulbure la marginea antigenului și anticorpului - un precipitat (vezi Fig. 48).

Reacția este urmată de un număr de controale (Tabelul 18). Secvența de introducere a ingredientelor de reacție în eprubetă este foarte importantă. Nu puteți stratifica serul pe antigen (în control - pe soluția izotonă), deoarece densitatea relativă a serului este mai mare, se va scufunda în fundul tubului, iar limita dintre lichide nu va fi detectată. .

Schema de stabilire a reacției de precipitare inelară

Tabelul nr. 13

Notă. + prezența unui „inel”; - absența unui „inel”.

Rezultatele se înregistrează după 5-30 de minute, în unele cazuri după o oră, ca întotdeauna, începând cu controale. „Inelul” din a 2-a eprubetă indică capacitatea serului imun de a intra într-o reacție specifică cu antigenul corespunzător. Nu ar trebui să existe „inele” în eprubetele 3-5 - nu există anticorpi și antigeni care să corespundă unul altuia. Un „inel” în primul tub - un rezultat pozitiv al reacției - indică faptul că antigenul de testat corespunde serului imunitar luat, absența unui „inel” („inel” doar în al 2-lea tub) indică inconsecvența lor - o reacție negativă rezultat.

Reacția de precipitare în agar (gel). Particularitatea reacției este că interacțiunea dintre antigen și anticorp are loc într-un mediu dens, adică într-un gel. Precipitatul rezultat dă o bandă tulbure în grosimea mediului. Absența unei benzi indică o nepotrivire între componentele reacției. Această reacție este utilizată pe scară largă în cercetarea medicală și biologică, în special în studiul formării toxinelor în agentul cauzal al difteriei.

Studiați natura interacțiunii antigenului cu anticorpul din reacție
precipitare în agar, schițați rezultatul (luați cana de la profesor).

Reacția de inhibare a hemaglutinării

serol. reactii bazate pe inhibarea aglutinarii eritrocitelor. Aplicați 2 tipuri de G. t. r: reacția de inhibiție a hemaglutinării active (RTGA) și pasive (RTPGA). RTGA utilizat pentru serodiagnosticul infecțiilor virale și tiparea virusurilor necunoscute. În prima variantă la o serie de diluții duble s-to b-nogo, luate la începutul bolii și după 10-14 zile într-un volum de 0,25 ml, se adaugă 0,25 ml din diagnosticul viral standard. După o oră de expunere la temperatura camerei, în fiecare tub (godeu) se adaugă 0,5 ml dintr-o suspensie 1% de eritrocite de pui. După 30 - 60 de minute în ambele rânduri se determină ultimele diluții de s-to, în care se remarcă inhibarea (absența) hemaglutinării. În cazul creșterii titrului de anticorpi de 4 ori sau mai mult, ei dau un răspuns pozitiv, în alte cazuri - unul negativ. Pentru tiparea virusului, se prepară o serie de diluții de două ori dintr-o probă standard într-un volum de 0,25 ml, se adaugă un volum egal de studiu la fiecare diluție. suspensie virală cu activitate de 4 unităţi hemaglutinante. (doze), incubate la temperatura camerei timp de 1 oră și completate cu 0,5 ml suspensie 1% de eritrocite de pui. Contabilitatea se desfășoară în același mod ca în versiunea anterioară. Virusul este recunoscut ca fiind identic cu s-ke dacă RTGA atinge un titru sau 1/2 titru din s-ki standard. Pe lângă aceasta și alte opțiuni, sunt puse 3 controale: s-ki, virus, eritrocite. RTPGA efectuate de obicei pentru a detecta Ag (haptene) bacteriene, fungice, protozoare în studiu. material. Este extrem de sensibil, specific, dar necesită timp de configurat. RTPGA se realizează, de asemenea, în 2 etape. În prima etapă, la o serie de diluții duble ale studiului. la Ag al materialului se adaugă un volum egal (de obicei 0,25 ml) de s-ki imun standard, luat într-o doză de lucru. Eprubetele sunt ținute într-un termostat timp de 2 ore. În prezența Ag corespunzător în material, are loc legarea Ab și, cu adăugarea ulterioară a unui diagnostic de eritrocite într-un număr de eprubete (și în funcție de cantitatea de Ag), aglutinarea eritrocitelor sensibilizate este inhibată. Experiența este însoțită de controale cu-ki, eritrocite și material.

(Sursa: Glosarul termenilor de microbiologie)

• - inhibarea aglutinării Ag de către Abs omologi ca urmare a contactului preliminar al Abs cu Ag cercetat, de obicei de natură haptică Pe baza competiției Ag pentru paratopul Ab...

  Dicţionar de microbiologie

• - procesul de lipire a eritrocitelor cu o suspensie virală. Sunt folosite pentru a indica virușii din mediu...

  Dicţionar de microbiologie

• - 1) procesul de lipire a eritrocitelor sensibilizate de Ag străin sau haptene cu At omoloage...

  Dicţionar de microbiologie

• - parte a lăstarului, din mugurii cărora nu se formează lăstari laterali ...

  Anatomia și morfologia plantelor

• - ...

  Enciclopedia tehnologiei

• este temperatura Т0 a gazului retardat izoentropic. Joacă un rol important în mișcarea unui gaz perfect ideal...

  Enciclopedia tehnologiei

• - parametrii unui gaz retardat izoentropic: densitatea de stagnare 0, temperatura de stagnare T0, presiunea totală p0, entalpia de stagnare H. Aceștia joacă un rol important în deplasarea unui gaz ideal și...

  Enciclopedia tehnologiei

• - una dintre caracteristicile unui flux de gaz de mare viteză, egală cu temperatura acestui gaz, este încetinită isentropic la viteza zero ...

  Marele dicționar politehnic enciclopedic

• - un indicator al eficacității unui medicament antitumoral, calculat ca raport dintre masa medie a tumorilor din grupul de control de animale la sfârșitul experimentului și masa medie a tumorilor din grupul de animale supuse tratamentului ...

  Dicţionar medical mare

• - restricția inhibiției radiate anterior de către un anumit grup de neuroni...

  Dicţionar medical mare

• - o metodă pentru detectarea și identificarea virusurilor, bazată pe capacitatea unor viruși de a aglutina selectiv eritrocitele anumitor specii de animale...

  Dicţionar medical mare

• - o metodă de detectare și identificare a antigenelor sau a anticorpilor, bazată pe fenomenul de aglutinare a eritrocitelor care are loc în prezența acestora, pe suprafața căreia...

  Dicţionar medical mare

• - vezi Reacția de hemaglutinare indirectă...

  Dicţionar medical mare

• - o metodă de identificare a unui virus sau de detectare a anticorpilor antivirali în serul sanguin al pacientului, bazată pe fenomenul de absență a aglutinării eritrocitelor de către un preparat care conține un virus în prezența unui imun la acesta ...

  Dicţionar medical mare

• - o metodă de evaluare a imunității celulare sau a sensibilizării de tip întârziat, care detectează un factor nespecific produs de limfocitele activate care inhibă migrarea macrofagelor sub...

  Dicţionar medical mare

• - "... Elemente de prindere de frânare moale - dispozitive de prindere care conțin un element elastic, a cărui deformare determină mărimea forței care acționează asupra organului de frânare ..." Sursa: Decretul Gosgortekhnadzor al Federației Ruse din 16 mai ...

  Terminologie oficială

„Reacția de inhibiție a hemaglutinării” în cărți

Unele tipuri de frânare