Teste pentru infecția HIV: caracteristici ale procedurii și interpretarea rezultatelor. Metode moderne de diagnosticare a infecției cu HIV Metode de laborator pentru diagnosticarea HIV

Diagnosticul infecției cu HIV într-un stadiu incipient este esențial. Depinde de complexitatea terapiei și de dezvoltare complicatii patologice. Astăzi sunt multe metode inovatoare cercetări pentru a identifica un astfel de diagnostic teribil. Acesta este ceea ce se va discuta mai departe.

Ce metode sunt disponibile pentru diagnosticarea infecției cu HIV?

Diagnosticul de laborator

• Se determină anticorpii, antigenii agenților patogeni și complexele imune.
• Atunci când este detectat un virus, acesta este cultivat și sunt detectate materialul genomic și enzimele.
• Se evaluează funcționalitatea sistemului imunitar.
• Se efectuează supravegherea epidemiologică și monitorizarea prevalenței virusului imunodeficienței umane.
• Se studiază dinamica distribuției și se determină populația.
• Este posibil să se determine gradul de siguranță al transplantului și al transfuziei de sânge.

Diagnostic diferentiat

• La primele simptome ale infecției cu HIV, care se află în faza acută, mai ales dacă există un sindrom asemănător mononucleozei. Diagnosticul se bazează pe patologii precum mononucleoza natura infectioasa, sifilis, rubeolă, adenovirus, leucemie în forma acuta, yersinioza, hiperkeratoza.
• Dacă HIV trece în stadiul de limfadenopatie generalizată de natură persistentă, atunci bolile sunt diferențiate în care Ganglionii limfatici crește. De exemplu, leucemia limfocitară, sifilisul, toxoplasmoza, limfogranulomatoza. În această fază, simptomele pacientului devin mai pronunțate.
• Dacă sunt detectate patologii secundare, se diferențiază imunodeficiența, care a apărut pe fondul luării anumitor grupuri de medicamente - radioterapie, utilizarea medicamentelor glucocorticosteroizi și a medicamentelor citostatice. Imunitatea este redusă semnificativ și în boli precum mielomul, leucemia limfoidă, neoplasmele oncologice și așa mai departe.
• Dacă HIV este localizat în cavitatea bucală, apoi se diferențiază bolile mucoasei bucale.

Diagnosticare Express

• Cel mai test exact este imunocromatografic. Testul constă în benzi speciale pe care se aplică sânge capilar, urină sau saliva. Dacă sunt detectați anticorpi împotriva HIV, atunci banda are o culoare și o linie de control. Dacă răspunsul este nu, doar linia este vizibilă.
• Truse de utilizare la domiciliu OraSure Technologies1. Dezvoltator - America. Acest test a fost aprobat de FDA.
• Există și alte teste rapide, dar nu au aprobarea specialiștilor și, prin urmare, sunt nedorite pentru test.

Dacă a fost dezvăluită o reacție pozitivă la virusul imunodeficienței umane, este necesar să se efectueze suplimentar o examinare adecvată într-un cadru clinic.

Diagnosticul precoce

Pentru a autodiagnostica patologia pe primele etape, acordați atenție simptomatologiei care există în acest caz:

reacția în lanț a polimerazei

Acesta este un diagnostic destul de costisitor, dar în unele cazuri poate da un rezultat fals. Prin urmare, la screening-ul pentru HIV, sunt utilizate suplimentar și alte metode.

blotting imun

Rezultatul este determinat de legarea proteinelor din sânge de proteinele aplicate pe banda de nitroceluloză. Dacă HIV este prezent în corpul pacientului, atunci liniile simple sunt translucide. Există anumiți indicatori de identificare a liniilor care semnalează prezența HIV. Dar există și cifre scăzute. În acest caz, există riscul de dezvoltare stadiul inițial virusul imunodeficienței umane, formarea de tumori oncologice, tuberculoză, transfuzie de sânge.

test ELISA

Există mai multe tipuri de teste ELISA, dar sunt utilizate doar cele mai recente evoluții - a 3-a și a 4-a generație. Tehnica se bazează pe colectarea lichidului sanguin dintr-o venă. Există o anumită pregătire - pacientul nu trebuie să mănânce cu 8 ore înainte de test. Prin urmare, sângele este colectat dimineața pe stomacul gol.

Cum se face diagnosticul în perioada de incubație?

După aceea, pe tot parcursul anului, persoana se află sub atenta atenție a medicilor și este supusă mai multor examinări. Abia după această perioadă este posibil să se stabilească cu exactitate diagnosticul - HIV.

Caracteristicile diagnosticului la copii

Primele teste pentru HIV la un copil sunt efectuate în a doua zi după naștere. Apoi după ce ating 2 luni, apoi la fiecare 4 luni.

Pentru a detecta patologia în copilărie se folosesc metode de examinare serologică, PCR. Acesta din urmă tip de diagnostic al bolii face posibilă identificarea ADN-ului și ARN-ului virusului în primele luni de viață ale bebelușului. Pentru aceasta, se recoltează sânge de la bebeluș, care este ulterior plasat într-o eprubetă care conține conservantul EDTA. În plus, materialul este păstrat timp de 2 zile la o temperatură care nu depășește 8 grade. Dar înghețarea sângelui nu este acceptabilă. Se poate folosi și lichidul de sânge uscat, care este obținut din sânge integral și uscat.

Etapele diagnosticului

• Presortare, aka screening.
• Diagnosticare de referință.
• Etapa de confirmare sau diagnostic de expert.

Screening - pre-sortare

Trebuie să știți că ELISA poate, în anumite condiții, să dea un rezultat fals pozitiv. Aceasta poate fi în perioada de naștere a copilului, cu boli autoimune (psoriazis, reumatism, lupus etc.), boala Epstein-Bar și alte patologii.

Diagnosticare de referință

Etapa de confirmare - expert

Erori la diagnosticare

Oricât de paradoxal ar părea, există posibilitatea de a obține un rezultat fals pozitiv. Acest lucru se întâmplă de obicei în timpul testării la domiciliu, mai ales în cazurile în care sunt utilizate teste rapide. Într-un cadru clinic, acest lucru este posibil numai cu anumite boli sau afecțiuni:

• perioada de sarcină;
• reacția încrucișată a corpului;
• tulburări patologice autoimune;
• răceli în stadiul acut;
• neoplasme oncologice;
• tuberculoză;
• scleroză.

Caracteristică - dacă o persoană este infectată cu viruși și ciuperci, atunci rezultatul testului poate fi, de asemenea, fals. Acest lucru este valabil mai ales în condițiile alergice.

Pregătirea pentru testare

• În primul rând, trebuie să vizitați specialistul corespunzător, astfel încât acesta să vă dea instrucțiuni precise cu privire la activitățile de pregătire.
• Testele de sânge sunt colectate întotdeauna pe stomacul gol. Prin urmare, înainte de a merge la clinică, nu puteți mânca nimic. Ultima ta masă ar trebui să fie cel târziu la ora 21:00.
• Este interzis fumatul în ziua testului.
• Nu beți alcool cu ​​o seară înainte.
• Dacă luați medicamente, asigurați-vă că vă consultați în prealabil cu medicul dumneavoastră. Pentru că multe medicamente sunt interzise înainte de a face teste HIV.
• Nu se recomandă efectuarea unei examinări cu ultrasunete cu câteva zile înainte de colectarea analizei.
• Nu este indicat să consumați alimente excesiv de grase și să consumați multe dulciuri cu o zi sau două înainte de procedură.

Diagnosticul infecției cu HIV (video)

În prezent, noile tehnologii de diagnostic fac posibilă identificarea cauzelor etiologice și patogenetice ale multor boli și afectează radical rezultatele tratamentului. Poate că cele mai impresionante rezultate ale introducerii acestor tehnologii în practica clinică au fost obținute în domeniul imunologiei și diagnosticului. boli infecțioase.

Sistemele de testare bazate pe imunotestul enzimatic și analiza imunochemiluminiscentă fac posibilă detectarea anticorpilor de diferite clase, ceea ce crește semnificativ conținutul de informații al metodelor de sensibilitate clinică, analitică și specificitate pentru diagnosticul bolilor infecțioase. Trebuie remarcat faptul că cele mai semnificative progrese în diagnosticul infecțiilor sunt asociate cu introducerea în practica de laborator a metodei reacției în lanț a polimerazei, care este considerată „standardul de aur” în diagnosticarea și evaluarea eficacității tratamentului unui numărul de boli infecțioase.

Diverse materiale biologice pot fi folosite pentru cercetare: ser, plasmă sanguină, răzuire, biopsie, pleurală sau fluid cerebrospinal(CSJ). În primul rând, metodele diagnostic de laborator infectiile au ca scop identificarea unor afectiuni precum hepatita virala B, C, D, infectia cu citomegalovirus, infectiile cu transmitere sexuala (gonoree, chlamydia, micoplasma, ureaplasma), tuberculoza, infectia HIV etc.

Infecția cu HIV este o boală cauzată de virusul imunodeficienței umane (HIV), perioadă lungă de timp persistând în limfocite, macrofage, celule ale țesutului nervos, rezultând o deteriorare lent progresivă a sistemului imunitar și sistemele nervoase organism, manifestată prin infecții secundare, tumori, encefalită subacută și alte modificări patologice.

Agenții cauzali ai infecției - virușii imunodeficienței umane de tipul 1 și 2 (HIV-1, HIV-2) - aparțin familiei retrovirusurilor, o subfamilie de viruși lenți. Virionii sunt particule sferice cu un diametru de 100-140 nm. Particula virală are o înveliș fosfolipidic extern, care include glicoproteine ​​(proteine ​​structurale) cu o anumită greutate moleculară, măsurată în kilodaltoni. În HIV-1, acestea sunt gpl60, gpl20, gp41. Învelișul interior al virusului, care acoperă miezul, este reprezentat și de proteine ​​cu o greutate moleculară cunoscută - p17, p24, p55 (HIV-2 conține gpl40, gpl05, gp36, p16, p25, p55).

Genomul HIV conține ARN și enzima transcriptază inversă (revertază). Pentru ca genomul retrovirusului să se conecteze cu genomul celulei gazdă, ADN-ul este mai întâi sintetizat pe șablonul ARN viral folosind revertasea. ADN-ul provirus este apoi integrat în genomul celulei gazdă. HIV are o variabilitate antigenică pronunțată, depășind semnificativ pe cea a virusului gripal.

În corpul uman, ținta principală a HIV sunt limfocitele T care transportă la suprafață cel mai mare număr receptorii CD4. După ce HIV intră în celulă cu ajutorul revertazei, virusul sintetizează ADN-ul după modelul ARN-ului său, care este integrat în aparatul genetic al celulei gazdă (limfocitele CD4) și rămâne acolo toată viața în starea de provirus. . Pe lângă ajutoarele de limfocite T, sunt afectate macrofagele, limfocitele B, celulele neurogliale, mucoasa intestinală și unele alte celule. Motivul scăderii numărului de limfocite T (celule CD4) este nu numai efectul citopatic direct al virusului, ci și fuziunea acestora cu celulele neinfectate. Odată cu înfrângerea limfocitelor T la pacienții cu infecție cu HIV, se observă activarea policlonală a limfocitelor B cu o creștere a sintezei imunoglobulinelor din toate clasele, în special IgG și IgA, și epuizarea ulterioară a acestei secțiuni a sistemului imunitar. Dereglarea proceselor imunitare se manifestă și prin creșterea nivelului de α-interferon, β2-microglobuline și o scădere a nivelului de IL-2. Ca urmare a disfuncției sistemului imunitar, în special cu o scădere a numărului de limfocite T (CD4) la 400 de celule la 1 μl de sânge sau mai puțin, apar condiții pentru replicarea necontrolată a HIV cu o creștere semnificativă a numărului de virioni. în diferite medii ale corpului. Ca urmare a înfrângerii multor părți ale sistemului imunitar, o persoană infectată cu HIV devine lipsită de apărare împotriva agenților patogeni ai diferitelor infecții.

Pe fondul creșterii imunosupresiei, se dezvoltă boli progresive severe care nu apar la o persoană cu un sistem imunitar care funcționează normal. Acestea sunt boli pe care Organizația Mondială a Sănătății (OMS) le-a definit drept marker SIDA sau boli care definesc SIDA.

Boli care definesc SIDA

Primul grup - boli inerente numai imunodeficienței severe (nivel CD4<200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.

Al doilea grup - boli care se pot dezvolta atât pe fondul imunodeficienței severe, cât și, în unele cazuri, fără aceasta.

Prin urmare, în aceste cazuri, este necesară confirmarea de laborator a diagnosticului.

Primul grup:

• candidoza esofagului, traheei, bronhiilor;
• criptococoză extrapulmonară;
• criptosporidioză cu diaree mai mult de 1 lună;
• leziuni de citomegalovirus ale diferitelor organe, altele decât ficatul, splina sau ganglionii limfatici la un pacient cu vârsta peste 1 lună;
• infecție cauzată de virusul herpes simplex, manifestată prin ulcere la nivelul pielii și mucoaselor care persistă mai mult de 1 lună, precum și bronșite, pneumonii sau esofagite de orice durată, care afectează un pacient cu vârsta peste 1 lună;
• sarcomul Kaposi generalizat la pacienții cu vârsta sub 60 de ani;
• limfom cerebral (primar) la pacienții cu vârsta sub 60 de ani;
• pneumonie interstițială limfocitară și/sau displazie limfoidă pulmonară la copii sub 12 ani;
• infecție diseminată cauzată de micobacterii atipice (complex de micobacterie M. avium intracellulare) cu localizare sau localizare extrapulmonară (pe lângă plămâni) în piele, ganglioni limfatici cervicali, ganglioni limfatici ai rădăcinilor plămânilor;
• pneumonie pneumocystis;
• leucoencefalopatie multifocală progresivă;
• toxoplasmoza creierului la pacienții cu vârsta peste 1 lună.

A doua grupa:

• infecții bacteriene, combinate sau recurente, la copiii sub 13 ani (mai mult de două cazuri în 2 ani de observație): sepsis, pneumonie, meningită, afectarea oaselor sau articulațiilor, abcese cauzate de bacili hemofili, streptococi;
• coccidioidomicoză diseminată (localizare extrapulmonară);
• encefalopatie HIV (demență HIV, demență SIDA);
• histoplasmoză cu diaree care persistă mai mult de 1 lună;
• isosporiaza cu diaree care persistă mai mult de 1 lună;
• sarcomul Kaposi la orice vârstă;
• limfom cerebral (primar) la persoane de orice vârstă;
• alte limfoame cu celule B (cu excepția bolii Hodgkin) sau limfoame cu imunofenotip necunoscut: limfoame cu celule mici (cum ar fi limfomul Burkitt etc.); sarcoame imunoblastice (limfoame imunoblastice, cu celule mari, histiocitare difuze, limfoame difuze nediferențiate);
• micobacterioză diseminată (nu tuberculoză) cu leziuni în plus față de plămânii pielii, ganglionii limfatici cervicali sau bazali;
• tuberculoză extrapulmonară (cu afectarea organelor interne, pe lângă plămâni);
• septicemia cu salmonella, recurentă;
• Distrofie HIV (epuizare, scădere bruscă în greutate).

Tabelul 1 (vezi referința de mai sus) enumeră bolile care definesc SIDA și agenții lor etiologici.

Există multe clasificări ale SIDA.

Conform noii clasificări propuse de Centers for Disease Control din SUA (Tabelul 2 - vezi linkul către sursa de mai sus), diagnosticul de SIDA este stabilit pentru persoanele cu un nivel de limfocite CD4 mai mic de 200/μL, chiar și în absența bolilor care definesc SIDA.

Categoria B include diverse sindroame, dintre care cele mai importante sunt angiomatoza bacilară, candidoza orofaringiană, candidoza vulvovaginală recurentă, dificil de tratat, displazia cervicală, carcinomul cervical, purpura trombocitopenică idiopatică, listerioza, neuropatia periferică.

Anticorpi împotriva HIV-1 și HIV-2 în sânge

Anticorpii împotriva HIV-1 și HIV-2 sunt în mod normal absenți în serul sanguin.

Determinarea anticorpilor la HIV este principala metodă de diagnostic de laborator al infecției cu HIV. Metoda se bazează pe imunotestul enzimatic (ELISA) - sensibilitatea este mai mare de 99,5%, specificitatea este mai mare de 99,8%. Anticorpii HIV apar la 90-95% dintre cei infectați în decurs de 1 lună de la infectare, în 5-9% - după 6 luni, în 0,5-1% - la o dată ulterioară. În stadiul de SIDA, numărul de anticorpi poate scădea până când dispare complet.

Rezultatul studiului se exprimă calitativ: pozitiv sau negativ.

Un rezultat negativ al testului indică absența anticorpilor împotriva HIV-1 și HIV-2 în serul sanguin. Laboratorul emite un rezultat negativ de îndată ce este gata. La primirea unui rezultat pozitiv - detectarea anticorpilor la HIV - pentru a evita rezultatele fals pozitive în laborator, analiza se repetă de încă 2 ori.

Imunoblotting pentru anticorpi la proteinele virale HIV în serul sanguin

Anticorpii împotriva proteinelor virale HIV sunt în mod normal absenți în serul sanguin.

Metoda ELISA pentru determinarea anticorpilor la HIV este o metodă de screening. La primirea unui rezultat pozitiv, pentru a confirma specificitatea acestuia, se folosește metoda Western-blot - contraprecipitarea în gelul de anticorpi din serul sanguin al pacientului cu diferite proteine ​​virale supuse separării prin greutate moleculară prin electroforeză și aplicate pe nitroceluloză. Se determină anticorpi la proteinele virale gp41, gpl20, gpl60, p24, pi8, p17 etc.

Conform recomandărilor Centrului Rus pentru Prevenirea și Controlul SIDA, detectarea anticorpilor la una dintre glicoproteinele gp41, gpl20, gpl60 ar trebui considerată un rezultat pozitiv. Dacă sunt detectați anticorpi la alte proteine ​​ale virusului, rezultatul este considerat îndoielnic, un astfel de pacient trebuie examinat de două ori - după 3 și 6 luni.

Absența anticorpilor împotriva proteinelor specifice HIV înseamnă că imunotestul enzimatic a dat un rezultat fals pozitiv. În același timp, în munca practică, la evaluarea rezultatelor metodei de imunoblotting, este necesar să ne ghidăm după instrucțiunile furnizate de companie la „kitul de imunoblotting” utilizat.

Metoda de imunoblot este utilizată pentru diagnosticul de laborator al infecției cu HIV.

antigenul p24 în serul sanguin

Antigenul p24 este în mod normal absent în serul sanguin.

Antigenul p24 este proteina peretelui nucleotidului HIV. Stadiul manifestărilor primare după infectarea cu HIV este o consecință a începerii procesului de replicare. Antigenul p24 apare în sânge la 2 săptămâni după infectare și poate fi detectat prin ELISA în perioada de la 2 la 8 săptămâni. După 2 luni de la momentul infecției, antigenul p24 dispare din sânge. În viitor, în cursul clinic al infecției cu HIV, se observă o a doua creștere a conținutului de proteină p24 din sânge. Se încadrează în perioada de formare a SIDA. Sistemele de testare ELISA existente pentru detectarea antigenului p24 sunt utilizate pentru depistarea precoce a HIV la donatorii de sânge și la copii, determinarea prognosticului evoluției SIDA și monitorizarea terapiei în curs de desfășurare la pacienții cu SIDA. ELISA are o sensibilitate analitică ridicată, ceea ce face posibilă detectarea antigenului p24 al HIV-1 în serul sanguin la o concentrație de 5-10 pg/ml și HIV-2 - mai puțin de 0,5 ng/ml și specificitate. Cu toate acestea, trebuie remarcat faptul că nivelul de antigen p24 din sânge este supus unor variații individuale, ceea ce înseamnă că doar 20-30% dintre pacienți pot fi detectați folosind acest studiu în perioada timpurie după infecție (Rose N.R. et al., 1997).

Anticorpii antigenului p24 din clasele IgM și IgG apar în sânge din a 2-a săptămână, ating un vârf în 2-4 săptămâni și rămân la acest nivel de mai multe ori: anticorpi din clasa IgM - timp de câteva luni, dispărând în decurs de un an de la infectare , iar anticorpii IgG pot persista ani de zile.

Algoritmul de diagnosticare a infecției cu HIV depinde de faza bolii și se caracterizează printr-o modificare a dinamicii de detectare a anticorpilor de diferite clase (Fig. 1, 2 - vezi linkul către sursa de mai sus).

Rezultatul studiului este exprimat calitativ - pozitiv sau negativ. Un rezultat negativ al testului indică absența anticorpilor la HIV-1 și HIV-2 și a antigenului p24 în serul sanguin.

Laboratorul emite un rezultat negativ de îndată ce este gata. La primirea unui rezultat pozitiv - detectarea anticorpilor la HIV-1 și HIV-2 și/sau antigenul p24 - pentru a evita rezultatele fals pozitive în laborator, analiza se repetă de încă 2 ori.

Indiferent de rezultatele testelor obținute, proba de sânge a pacientului și rezultatele a 3 analize sunt trimise de laborator către centrul regional SIDA pentru confirmarea unui rezultat pozitiv sau verificarea unui rezultat nedeterminat. În astfel de cazuri, centrul regional SIDA emite răspunsul final pentru acest studiu.

Detectarea HIV prin reacție în lanț a polimerazei (calitativ)

Detectarea HIV prin reacție în lanț a polimerazei - PCR (calitativ) se realizează pentru a:

• rezolvarea rezultatelor îndoielnice ale imunoblot;
• pentru diagnosticul precoce al infecției cu HIV;
• monitorizarea eficacității tratamentului antiviral;
• determinarea stadiului bolii SIDA (tranziția infecției într-o boală).

În cazul infecției primare cu HIV, metoda PCR face posibilă detectarea ARN HIV în sânge încă de la 10-14 zile după infectare.

Rezultatul studiului se exprimă calitativ: pozitiv sau negativ. Un rezultat negativ al testului indică absența ARN HIV în sânge.

Un rezultat pozitiv - detectarea ARN HIV - indică infecția pacientului.

Detectarea HIV prin reacție în lanț a polimerazei (cantitativă)

În mod normal, HIV este absent în sânge.

Determinarea cantitativă directă a ARN-ului HIV folosind PCR permite o determinare mai precisă decât determinarea conținutului de celule CD4 pentru a prezice rata de dezvoltare a SIDA la persoanele infectate cu HIV, prin urmare, pentru a evalua mai precis supraviețuirea acestora. Un conținut ridicat de particule virale se corelează de obicei cu o încălcare pronunțată a stării imunitare și un conținut scăzut de celule CD4. Un număr scăzut de particule virale se corelează în general cu o stare imunitară mai bună și un număr mai mare de celule CD4. Conținutul de ARN viral din sânge face posibilă prezicerea tranziției bolii la stadiul clinic. Cu niveluri HIV ARN-1 > 74.100 de copii/ml, aproape toți pacienții se dezvoltă tablou clinic SIDA (Senior D., Holden E., 1996).

Persoanele cu niveluri sanguine de HIV-1 > 10.000 de copii/ml au șanse de 10,8 ori mai mari de a dezvolta SIDA decât persoanele cu niveluri de HIV-1 în sânge.<10 000 копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.

Un grup de experți americani a dezvoltat indicații pentru tratamentul pacienților cu HIV. Tratamentul este indicat pacienților cu un număr de CD4 în sânge<300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >20.000 de copii/ml (PCR). Evaluarea rezultatelor terapiei antiretrovirale la persoanele infectate cu HIV se realizează prin reducerea nivelului de ARN HIV seric.

Cu un tratament eficient, nivelul viremiei ar trebui să scadă de 10 ori în primele 8 săptămâni și să fie sub limita de detecție a metodei (PCR) (<500 копий/мл) через 4-6 месяцев после начала терапии.

Astfel, până în prezent, multe metode de cercetare au fost introduse și utilizate în practica clinică pentru diagnosticarea infecției cu HIV, ca și pentru toate celelalte infecții virale. Printre acestea, rolul principal este acordat studiilor serologice. Principalele metode de diagnosticare a infecțiilor cu HIV sunt prezentate în Tabelul 3 (vezi linkul către sursa de mai sus), unde sunt împărțite în patru niveluri în funcție de importanța fiecărei metode de depistare a virusurilor:

• A - testul este de obicei folosit pentru a confirma diagnosticul;
• B - testul este util în anumite circumstanțe pentru diagnosticul anumitor forme de infecție;
• C - testul este rar folosit în scopuri de diagnostic, dar este de mare importanță pentru anchetele epidemiologice;
• D - testul nu este folosit de obicei de laboratoare în scopuri de diagnostic.

Deoarece pentru diagnosticarea infecțiilor virale, pe lângă alegerea metodei optime de analiză, este la fel de important să se determine corect și să se preia biomaterialul pentru cercetare, Tabelul 4 (a se vedea linkul către sursa de mai sus) oferă recomandări pentru alegerea biomaterialului optim. pentru studiul infectiei HIV.

Pentru a monitoriza persoanele infectate cu HIV, ar trebui să folosiți posibilitățile unui studiu cuprinzător al stării imune - o determinare cantitativă și funcțională a tuturor legăturilor sale: imunitatea umorală, celulară și rezistența nespecifică în general.

În condițiile moderne de laborator, principiul în mai multe etape de evaluare a stării imunologice include determinarea unei subpopulații de limfocite, imunoglobuline din sânge. La evaluarea indicatorilor, trebuie luat în considerare faptul că infecția cu HIV se caracterizează printr-o scădere a raportului celulelor T CD4 / CD8 mai mică de 1. Indicele CD4 / CD8 1,5-2,5 - indică o stare norrergică, mai mult de 2,5 - indică hiperactivitate , mai puțin 1,0 - indică imunodeficiență. De asemenea, raportul CD4/CD8 poate fi mai mic de 1 în cazul inflamației severe.

Acest raport este de o importanță fundamentală în evaluarea sistemului imunitar la pacienții cu SIDA, deoarece HIV infectează și distruge selectiv limfocitele CD4, drept urmare raportul CD4/CD8 scade la valori semnificativ mai mici de 1.

Evaluarea stării imunologice se bazează și pe identificarea defectelor generale sau „grote” ale sistemului imunității celulare și umorale: hipergammaglobulinemie (concentrație crescută de IgA, IgM, IgG) sau hipogammaglobulinemie în stadiul terminal; creșterea concentrației complexelor imune circulante; scăderea producției de citokine; slăbirea răspunsului limfocitelor la antigeni și mitogeni.

Încălcarea raportului populațiilor din totalul de limfocite B este caracteristică insuficienței imunității umorale. Cu toate acestea, aceste modificări nu sunt specifice infecției cu HIV și pot apărea în alte boli. Într-o evaluare cuprinzătoare a unui număr de alți parametri de laborator, ar trebui să se țină seama de faptul că infecția cu HIV se caracterizează și prin: anemie, limfopenie și leucopenie, trombocitopenie, o creștere a nivelului de β2-microglobuline și a proteinei C reactive, o creșterea activității transaminazelor din serul sanguin.

Doar testele speciale pot detecta SIDA. Procesul de testare în sine constă în detectarea anticorpilor care sunt produși de organism ca răspuns la apariția virusului. Metodele de laborator pentru diagnosticarea SIDA includ patru teste care sunt folosite pentru a detecta această boală.

Prima - ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) este cea mai comună metodă de diagnosticare. Această analiză poate determina cantitatea de anticorpi care s-au acumulat în organism. Acest lucru este de obicei posibil numai dacă un virus a intrat în sânge și au trecut trei luni de atunci. După cum arată rezultatele practicii, un procent din cazuri oferă un rezultat fals negativ sau fals pozitiv.

Un rezultat fals negativ este posibil dacă nu au fost încă dezvoltați anticorpi împotriva virusului sau dacă SIDA este în stadiul terminal, adică virusul este prezent în sânge, dar există atât de mult încât anticorpii și celulele CD-4 sunt practic absente. Pentru a verifica un rezultat negativ, puteți relua ELISA, dar numai după 3 luni.

În cele mai multe cazuri, un rezultat fals pozitiv oferă un sondaj asupra pacienților care suferă de boli cronice autoimune, infecțioase, oncologice și de altă natură. Rezultate fals pozitive pot apărea și la femeile însărcinate. Prin urmare, fiecare rezultat pozitiv este neapărat verificat din nou, dar numai pe imunoblot - acesta este un test mai sensibil.

Dacă rezultatul imunoblot este pozitiv, mai ales după rezultatul ELISA, atunci fiabilitatea este de 99,9%, iar aceasta este acuratețea maximă pentru un test medical (în afară de oricare).

Al doilea este imunoblot (blotting imun complet). Acest test detectează prezența anticorpilor specifici la HIV. În acest caz, rezultatul este negativ, pozitiv, îndoielnic (se mai numește și nedefinit).

Un rezultat discutabil poate indica faptul că HIV este prezent în fluxul sanguin, pentru care organismul nu a dezvoltat încă întreaga gamă de anticorpi. În acest caz, anticorpii împotriva HIV în ser apar după 1-3-6 luni. unul după altul, din momentul în care s-a obţinut primul rezultat discutabil. Dacă rezultatele sunt confirmate, atunci aceasta indică o infecție cu HIV în stadiul inițial

Un rezultat nedeterminat al acestui test poate indica contrariul. Nu există nicio infecție cu HIV în sine, dar în corpul uman trăiesc anticorpi similari anticorpilor împotriva HIV. De regulă, un rezultat îndoielnic apare la femeile însărcinate, la pacienții cu tuberculoză, primitorii, pacienții cu cancer și, de asemenea, la cei care au primit transfuzii de sânge (adică, transfuzii de sânge) în mod repetat. Un pacient al cărui rezultat al acestui test a arătat incertitudine este observat de un specialist în boli infecțioase timp de șase luni și este testat după 1-3-6 luni.

Al treilea este PCR (reacția în lanț a polimerazei). Acest diagnostic de SIDA vă permite să determinați ADN-ul și ARN-ul virusului. Aceasta este o reacție destul de sensibilă și eficientă, care vă permite să obțineți un rezultat prin examinarea ADN-ului. În acest caz, ADN-ul este prelevat dintr-o celulă și examinat prin înmulțirea secvențelor ADN caracteristice

Acest test se aplică:

• pentru a determina ce virus este în organism (există HIV 1 și HIV-2);
• pentru a determina prezența HIV sau absența acestuia;
• pentru a determina și monitoriza încărcătura virală;
• pentru a determina statutul HIV al unui nou-născut dintr-o mamă infectată cu HIV.

Acest test este extrem de sensibil: poate detecta virusul chiar dacă au trecut aproximativ zece zile de la presupusul moment al infecției. Această sensibilitate ridicată a testului reacționează și la alte infecții, așa că de multe ori dă rezultate fals pozitive. Rezultatele acestui test nu constituie baza unui diagnostic definitiv.

Efectuarea acestui test necesită personal medical înalt calificat și echipamente de laborator sofisticate. Acesta este un test costisitor, deci nu este folosit la testarea HIV gratuită.

Al patrulea este un test rapid. Acest test este utilizat mai ales în cazuri de urgență - în timpul nașterii, din motive de sănătate în timpul intervenției chirurgicale. Rezultatul unui test rapid este de obicei confirmat de un test HIV de rutină.

Diagnosticul clinic și de laborator al infecției cu HIV are trei directii:

1. Stabilirea faptului infecției cu HIV, diagnosticarea infecției cu HIV.
2. Determinarea stadiului evoluției clinice a bolii și identificarea bolilor secundare.
3. Prognosticul evoluției evoluției clinice a bolii, monitorizarea de laborator a eficacității tratamentului și a efectelor secundare ale medicamentelor antiretrovirale.

1. Stabilirea infectiei HIV, diagnosticarea infectiei HIV

Pentru determinarea infecției cu HIV se folosesc următorii indicatori specifici: anticorpi la HIV, antigeni HIV, ARN HIV și ADN provirus. Anticorpii împotriva HIV sunt determinați prin imunotest enzimatic (ELISA) sau imunoblot, care este în esență un tip de ELISA. Antigenele (proteinele) HIV sunt determinate prin ELISA. Cu ajutorul metodelor genetice moleculare de reacție în lanț a polimerazei (PNR) și bDNA, este posibil să se determine ARN HIV și ADN-ul provirus. Utilizarea unei metode suplimentare de hibridizare a acizilor nucleici cu sonde ADN specifice vă permite să verificați specificitatea secvențelor de ADN obținute în timpul PCR. Sensibilitatea PCR - detectarea genelor virale într-una din cinci mii de celule.

În timpul infecției primare, se observă următoarea dinamică a markerilor HIV din sângele celor infectați. În prima lună, ca urmare a activării procesului de replicare, are loc o creștere bruscă a încărcăturii virale (conținutul de ARN HIV în plasmă), apoi, datorită diseminării virusului și infecției masive a celulelor țintă din sânge și ganglionii limfatici, devine posibilă determinarea ADN-ului proviral. De o valoare diagnostică primordială este faptul de a detecta ADN-ul provirusului integrat în genomul celulei țintă.

Încărcarea virală reflectă intensitatea procesului de replicare în celulele infectate. În perioada infecției primare, nivelul încărcăturii virale este diferit atunci când este infectat cu diferite subtipuri de HIV, dar dinamica modificărilor sale este aproximativ aceeași. Deci, atunci când este infectat cu subtipul B, de exemplu, dacă în prima lună după infectare valoarea încărcăturii virale este de 700 de copii / ml, atunci în a 2-a lună există o scădere la 600, în a 3-a - la 100, în al 4-lea - până la 50 de exemplare / ml. O astfel de dinamică este observată pe fondul creșterii conținutului de anticorpi specifici împotriva HIV în sânge. Conținutul de ADN proviral în celulele mononucleare sanguine ale pacienților infectați cu HIV este caracterizat de relativă constanță în primele 6 luni cu ușoare fluctuații la unele subtipuri. Astfel, încărcările de ARN și ADN nu sunt identice.

În timpul etapei de incubare, de ceva timp, nu se formează anticorpi specifici împotriva HIV într-o cantitate suficientă pentru a fi determinată prin metodele de laborator existente. Înainte de detectarea anticorpilor, se observă pentru un timp foarte scurt apariția în sânge a proteinei Nef, care reprimă procesul de replicare, și a proteinei structurale p24. Antigenul p24 poate fi detectat în sânge prin test imunosorbent legat de enzime deja la 1-2 săptămâni după infecție și poate fi determinat până în a 8-a săptămână, apoi conținutul său scade brusc. În plus, în cursul clinic al infecției cu HIV, se observă o a doua creștere a conținutului de proteină p24 din sânge. Se încadrează în perioada de formare a SIDA. Dispariția proteinelor de bază p24 libere (nelegate de anticorpi) din sânge și apariția anticorpilor specifici la proteinele HIV marchează debutul seroconversiei (Fig. 9.6).

Viremia și antigenemia determină formarea de anticorpi specifici clasei IgM (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). Anticorpii liberi din clasele IgM și IgG la proteina p24 pot apărea începând cu a 2-a săptămână, conținutul acestora crește în 2-4 săptămâni, atingând un anumit nivel, care rămâne luni (IgM) și ani (IgG) (Fig. 9.7). ).

Apariția seroconversiei complete, când în sângele periferic se înregistrează un nivel ridicat de anticorpi IgG specifici la proteinele structurale HIV p24, gp41, gp120, gp160, facilitează foarte mult diagnosticul infecției cu HIV. Anticorpii HIV apar la 90-95% dintre cei infectați în decurs de 3 luni de la infectare, la 5-9% - în perioada de la 3 la 6 luni de la momentul infectarii și la 0,5-1% - la o dată ulterioară.

În ciuda faptului că anticorpii împotriva HIV apar ultimii, principalul indicator de diagnostic de laborator de până acum este detectarea anticorpilor specifici prin ELISA și imunoblot.

Datele prezentate în Tabelul 9.2 [spectacol] și 9.3 [spectacol] , demonstrează clar sensibilitatea ridicată a sistemelor moderne de testare ELISA în detectarea anticorpilor la HIV, care depășește sensibilitatea imunoblotării. În unele cazuri, atunci când se primește un rezultat pozitiv primar în ELISA, acesta poate fi confirmat prin imunoblot numai după 2-3 săptămâni.

La examinarea pacienților cu infecție HIV (infectați cu HIV) folosind sistemele de testare imunoblotting ale companiilor de top din lume, anticorpii la gp160 și p24/25 sunt detectați în toate cazurile, anticorpii la alte proteine ​​sunt detectați în 38,8-93,3% din cazuri (Tabelul 1). ). 9.4 [spectacol] ).

Dificultăți în detectarea anticorpilor la pacienții cu infecție HIV pot apărea în perioadele de viremie masivă și antigenemie, când anticorpii specifici existenți în sânge sunt asociați cu particule virale, iar procesul de replicare este înaintea producerii de noi anticorpi antivirali. Această situație poate să apară și să dispară în timpul procesului infecțios.

La pacienții cu un sistem imunitar inițial slăbit, viremia și antigenemia apar mai devreme și rămân la un nivel ridicat până la deznodământul bolii. Astfel de pacienți au un conținut scăzut de anticorpi liberi împotriva HIV, din două motive - producția insuficientă de anticorpi de către limfocitele B și legarea anticorpilor de către virioni și proteine ​​​​HIV solubile, prin urmare, pentru a determina infecția, sistemele de testare cu sensibilitate crescută sau modificări ale sunt necesare metode de analiză care includ stadiul eliberării anticorpilor din complexele imune.

Cel mai adesea, o scădere a conținutului de anticorpi la HIV din motivele indicate are loc în stadiul terminal, când anticorpii HIV din serul tăieturii nu pot fi captați prin metode imunoenzimatice și nici prin imunoblot (Western blot). Pe lângă apariția anticorpilor specifici pentru HIV, răspunsul imun în primele 4 luni se caracterizează printr-o scădere a conținutului de CD4+ infectat din sânge și o creștere a celulelor CD8+. În plus, conținutul de celule care poartă receptorii CD4 și CD8 se stabilizează și rămâne neschimbat pentru o perioadă de timp. O creștere a conținutului de limfocite CD8 este o reacție de protecție, deoarece. citotoxicitatea dependentă de celule este realizată de limfocitele CD8+, care vizează distrugerea celulelor infectate cu HPV. Inițial, limfocitele citotoxice (CTL) răspund la proteina reglatoare Nef a virusului, care joacă un rol important în reducerea încărcăturii virale (ARN) din plasma unei persoane infectate cu HIV în primele luni. Apoi răspunsul CTL este format pentru alții, incl. proteine ​​structurale ale HIV, drept urmare, la 12 luni de la infectare, efectul cptotoxic crește semnificativ.

Scheme de diagnostic de laborator al infecției cu HIV

Ținând cont de dinamica dată a markerilor specifici ai infecției cu HIV, în practică este recomandabil să se respecte următoarele scheme pentru diagnosticul de laborator la adulți (Fig. 9.8-9.10).

Schemele reflectă cele trei etape principale ale diagnosticului primar de laborator al infecției cu HIV:

1. Screening.
2. Referinţă.
3. Expert.

Necesitatea mai multor etape ale diagnosticului de laborator se datorează în primul rând considerentelor economice. Deci, de exemplu, costul efectuării unui studiu de experți cu ajutorul sistemelor interne de testare prin imunoblot este de până la 40 de dolari SUA, screeningul (prin ELISA) este de aproximativ 0,2, adică raportul este de 1:200.

În prima etapă (Fig. 9.8), anticorpii împotriva HIV sunt determinați la subiecți utilizând un sistem de testare imunoenzimatică conceput pentru a detecta anticorpii la ambele tipuri de virus - HIV-1 și HIV-2.

Producătorii din sistemele de testare propuse folosesc un lizat viral, proteine ​​recombinate, peptide sintetice ca bază antigenică. Fiecare dintre purtătorii enumerați ai determinanților antigenici HIV are propriile sale avantaje și dezavantaje. Prin urmare, atunci când alegeți sisteme de testare cu costuri aproximativ egale, ar trebui să fie preferate kiturile cu cea mai mare sensibilitate (de preferință 100%). Dintre sistemele de testare de același cost și sensibilitate, este indicat să ne oprim asupra celor cu specificitate maximă.

Pe baza lizatului viral au fost create primele sisteme de testare pentru diagnosticul de laborator al infecției cu HIV. În anii 1980, astfel de sisteme de testare se caracterizau printr-o sensibilitate mai mică de 100% și o specificitate scăzută, manifestată printr-un număr mare (până la 60%) de rezultate fals pozitive.

În timpul formării unui virion într-o cultură de limfocite, învelișul acestuia este creat din membrana exterioară și, prin urmare, conține antigene din complexul major de histocompatibilitate din clasele I și II. Această împrejurare provoacă reacții fals pozitive în cazul în care în sângele pacienților sunt prezenți anticorpi la aloantigenele de histocompatibilitate.

Ulterior, pentru obținerea virusului, s-a propus utilizarea unei culturi de macrofage, în care particulele virale se formează predominant intracelular prin înmugurire nu din membrana exterioară a celulei, ci din membranele reticulului endoplasmatic. Această tehnologie a redus numărul de rezultate fals pozitive.

Imunotestele enzimatice sunt recunoscute ca fiind una dintre cele mai bune în ceea ce privește cele mai importante caracteristici - sensibilitate și specificitate - ca parte a cărora o combinație a unui lizat viral purificat cu peptide sintetice, care sunt regiunile cele mai semnificative pentru antigen ale proteinelor virale, sau se utilizează proteine ​​recombinante.

Sensibilitatea sistemului de testare depinde și de caracteristicile altor componente ale truselor. Astfel, sistemele de testare care folosesc conjugați care recunosc anticorpi nu numai din clasa IgG, ci și din IgM și IgA, fac posibilă detectarea unei faze mai timpurii a seroconversiei. Pare promițătoare utilizarea sistemelor de testare care pot determina simultan atât anticorpii antivirali, cât și antigenul p24, ceea ce face diagnosticul de laborator al infecției cu HIV și mai devreme.

Un rezultat pozitiv inițial trebuie reverificat prin retestarea probei în același sistem de testare, dar de preferință într-un lot diferit și de către un alt asistent de laborator. Dacă se obține un rezultat negativ în timpul celei de-a doua examinări, examinarea se efectuează a treia oară.

După confirmarea unui rezultat pozitiv, este de dorit să se preia din nou sânge și să se examineze pentru anticorpi la HIV ca fiind primari. Prelevarea repetată a probelor de sânge ajută la prevenirea unei erori cauzate de etichetarea inexactă a tuburilor și de completarea formularelor de trimitere.

Serul pozitiv în etapa de screening este trimis pentru studii de referință efectuate folosind două sau trei sisteme de testare ELISA foarte specifice. În cazul a două rezultate pozitive, se efectuează un studiu de specialitate prin imunoblot.

Utilizarea testelor imunosorbente legate de enzime în diagnosticul de referință, care pot fi utilizate pentru a diferenția anticorpii specifici la HIV-1 și HIV-2, facilitează munca ulterioară și vă permite să examinați imediat o probă pozitivă în stadiul de expert folosind imunoblotarea adecvată ( HIV-1 sau HIV-2).

O aviz de expert de laborator privind infecția cu HIV este emisă numai pe baza unui rezultat pozitiv Western blot. Atunci când se efectuează diagnostice de experți, este necesar să se utilizeze nomenclatura genelor și a produselor genetice ale HIV propusă în 1990 de un grup de experți OMS (Tabelul 9.5). [spectacol] ).

Specificitatea benzilor de pe imunoblot trebuie evaluată cu foarte mare atenție și atenție, folosind rezultatele studiilor serurilor de control (pozitive și negative), care sunt efectuate în paralel cu studiul probelor experimentale, și o probă de imunblot cu denumirea a proteinelor HIV (atașate de producător la sistemul de testare). Interpretarea rezultatelor obținute trebuie efectuată în conformitate cu instrucțiunile atașate sistemului de testare. De regulă, criteriul de pozitivitate este prezența obligatorie a anticorpilor la două proteine ​​(precursoare, exterioare sau transmembranare) codificate de gena env și posibila prezență a anticorpilor la produsele altor două gene structurale HIV - gag și pol ( Tabelul 9.6 [spectacol] ).

În cazul obținerii unui rezultat îndoielnic, este necesar să se utilizeze lista de recomandări pentru clarificarea finală a rezultatelor imunoblotării (Tabelul 9.7). [spectacol] ).

Conform recomandărilor Centrului Științific și Metodologic din Rusia pentru Prevenirea și Controlul SIDA, se consideră un rezultat pozitiv dacă există anticorpi la cel puțin una dintre proteinele gp41, gp120, gp160 în combinație cu anticorpi împotriva altor HIV-1 specifici. proteine ​​sau fără ele. Aceste recomandări se bazează pe experiența cu seruri de la copii din focare nosocomiale, în care au fost detectați adesea anticorpi la doar una dintre proteinele învelișului viral.

Cea mai mare parte a pacienților examinați inițial seropozitivi în ELISA aparține fazei de limfadenopatie generalizată persistentă (PGL) sau fazei asimptomatice. Prin urmare, pe un imunoblot (bandă de nitroceluloză pe care sunt imobilizate proteinele HIV), se determină de obicei următoarea combinație de anticorpi împotriva HIV-1: anticorpi la proteinele anvelopei gp160, gp120 și gp41 codificate de gena env, în combinație cu anticorpi împotriva proteinele centrale p24 (nucleocapsidul proteic codificat de gena gag) și p31/34 (endonucleaza codificată de gena pol).

Reacțiile pozitive numai cu proteine ​​gag și/sau pol pot apărea în faza incipientă a seroconversiei și, de asemenea, indică o infecție cauzată de HIV-2 sau o reacție nespecifică.

Dacă se obține un rezultat discutabil, este posibil să se utilizeze diverse tehnici metodologice pentru a clarifica faptul infecției cu HIV.

În funcție de capacitățile tehnice (disponibilitatea truselor și reactivilor de diagnosticare, echipamente cu echipament special și pregătirea personalului), laboratorul expert realizează studii suplimentare de diagnosticare (Fig. 9.10).

În unele cazuri, este recomandabil să se folosească metode genetice moleculare pentru a determina secvențele genetice ale HIV în ser, limfocitele din sânge sau puncția ganglionilor limfatici. Verificarea specificității secvențelor de ADN obținute prin PCR poate fi realizată prin hibridizarea acizilor nucleici cu sonde ADN specifice.

Metodele de radioimunoprecipitare (RIP) și imunofluorescență indirectă (IFl) pot fi, de asemenea, utilizate pentru verificarea finală a serurilor cu rezultate îndoielnice de imunoblot.

Detectarea ARN HIV în plasmă printr-o metodă calitativă sau cantitativă nu este semnificativă pentru diagnosticul infecției cu HIV. Un astfel de rezultat ar trebui confirmat prin metode standard, cum ar fi imunoblotting, la 2-4 luni de la primirea unui răspuns inițial discutabil sau negativ.

Izolarea HIV în cultura celulară este adevărul suprem. Cu toate acestea, metoda este complexă, costisitoare și se realizează doar în laboratoare de cercetare special echipate.

Conținutul de celule CD4+ din sânge este un indicator nespecific, cu toate acestea, în cazuri controversate (ELISA „+”, imunoblot „-”, prezența semnelor clinice de infecție cu HIV/SIDA), acesta poate fi folosit ca ghid. pentru a lua o decizie de specialitate. Dacă laboratorul are capacitatea de a efectua numai imunoblotting, atunci recomandările din tabelul 1 trebuie urmate. 9.7 și în fig. 9.9.

Persoanele ale căror seruri au rezultate discutabile (nedeterminate) într-o examinare de specialitate, cu excepția cazurilor de detectare a anticorpilor numai pentru p17 (HIV-1) sau p16 (HIV-2), trebuie retestate în decurs de 6 luni (după 3 luni). În cazul unei adevărate infecții cu HIV, după 3-6 luni, se observă o tendință „pozitivă” în spectrul de anticorpi - formare suplimentară de anticorpi la alte proteine ​​ale virusului. O reacție falsă se caracterizează prin persistența unui model de imunoblot ambiguu pentru o lungă perioadă de timp sau prin dispariția benzilor suspecte. Dacă, după perioada de timp specificată, rezultatele imunobtajării repetate sunt negative sau rămân îndoielnice, atunci în absența factorilor de risc, a simptomelor clinice sau a altor factori asociați cu infecția cu HIV, persoana poate fi considerată seronegativă pentru anticorpii la HIV- 1 și HIV-2.

Rezultate fals pozitive datorită conținutului în sângele pacienților de anticorpi la aloantigenele de histocompatibilitate, care fac parte din plicul HIV, apar pe imunoblot sub formă de benzi la nivelul gp41 și gp31. Cauzele altor reacții nespecifice (de exemplu, la p24, adesea întâlnite la indivizii cu procese autoimune) nu au fost încă clarificate.

Îmbunătățirea tehnologiei de producere a sistemelor de imunotest enzimatic a făcut posibilă atingerea unei sensibilități ridicate - până la 99,99%, în timp ce sensibilitatea metodei imunoblotting este de 97%. Prin urmare, un rezultat negativ al imunoblot cu rezultate ELISA pozitive poate indica o perioadă inițială de seroconversie caracterizată prin niveluri scăzute de anticorpi specifici. Prin urmare, este necesar să se repete studiul după 1,5-2 luni, adică timpul necesar pentru finalizarea seroconversiei, pentru a obține o concentrație de anticorpi specifici în sânge suficientă pentru a fi detectați prin imunoblot.

Un rezultat pozitiv (rezultate) al studiului la etapa de referință sau numai de screening a diagnosticului de laborator al infecției cu HIV, adică un rezultat pozitiv în orice sistem de testare imunoenzimatică, care în cele din urmă nu este confirmat de metodele experte, este interpretat ca prezență încrucișată. -anticorpi reactivi in ​​sangele anticorpilor examinati. Reactivitatea încrucișată se referă la legarea anticorpilor la situsuri nespecifice ale proteinelor sau peptidelor HIV utilizate ca bază antigenică în sistemul de testare în care se obține un rezultat pozitiv.

În absența imunodeficienței și a semnelor clinice de infecție cu HIV, astfel de persoane sunt considerate seronegative pentru anticorpii la HIV și ar trebui anulate.

Diagnosticul final al infecției cu HIV se stabilește numai pe baza tuturor datelor clinice, epidemiologice și de laborator. Doar medicul curant are dreptul de a informa pacientul cu privire la diagnosticul de infectie HIV.

Principala metodă de diagnostic de laborator de confirmare (expert) al infecției cu HIV este imunoblotting. Cu toate acestea, având în vedere sensibilitatea sa mai mică în comparație cu ELISA, un număr de cercetători au propus utilizarea unei combinații de mai multe sisteme de testare pentru determinarea finală a prezenței anticorpilor specifici la HIV. De exemplu, G. van der Groen et al. a propus o alternativă la metoda imunoblot pentru verificarea rezultatelor pozitive ale etapei de screening a diagnosticului de laborator al infecției cu HIV. Presupune studiul materialului în paralel în trei sisteme de testare, care se bazează pe diverse metode de depistare a anticorpilor specifici HIV (mai multe variante de ELISA, reacție de aglutinare) folosind antigene de natură diferită. Autorii au putut selecta astfel de combinații de sisteme de testare, a căror utilizare oferă sensibilitate și specificitate de 100% în comparație cu rezultatele obținute în imunoblot.

Costul scăzut al acestei metode de diagnosticare expertă este un avantaj incontestabil, cu toate acestea, lipsa de informații despre proteinele specifice ale virusului care există anticorpi în sângele pacientului nu permite evaluarea specificității reacției în fiecare caz individual, precum și ca urmărirea modificărilor în spectrul de anticorpi într-un stadiu incipient al seroconversiei.

Diagnosticul de laborator al infecției cu HIV la copiii născuți din mame infectate cu HIV are propriile sale caracteristici. Din momentul nașterii, pentru o lungă perioadă de timp (până la 15 luni), anticorpii materni împotriva HIV pot circula în sângele unor astfel de copii. Doar imunoglobulinele din clasa IgG pătrund în bariera placentară, prin urmare, identificarea mupoglobulinelor specifice HPV din clasele IgM și IgA la un copil poate confirma infecția, dar un rezultat negativ nu poate indica absența HIV.

Copiii cu vârsta sub 1 lună nu au încă replicare HPV, iar PCR este singura metodă de verificare. Determinarea antigenului p24 la copiii mai mari de 1 lună este, de asemenea, o metodă de confirmare.

Absența anticorpilor împotriva HIV la nou-născuți nu înseamnă că virusul nu a trecut bariera placentară. În orice caz, copiii mamelor infectate cu HIV sunt supuși examinării și observării diagnosticului de laborator timp de 36 de luni de la naștere.

Rezultatele testelor de laborator pentru markerii infecției cu HIV necesită o interpretare atentă și trebuie luate în considerare numai împreună cu datele din anchetele epidemiologice și clinice. Pe de altă parte, trebuie remarcat faptul că, în ciuda sensibilității ridicate a metodelor moderne, rezultatele negative ale testelor nu pot exclude complet prezența infecției cu HIV. Prin urmare, un rezultat negativ al testului, de exemplu, prin imunoblotting, poate fi formulat doar ca absența anticorpilor specifici pentru HIV-1 și HIV-2.

Diagnosticul infecției cu HIV la pacienții seronegativi

Calitatea sistemelor de testare utilizate în diagnosticul de laborator al infecției cu HIV se îmbunătățește în fiecare an, iar sensibilitatea acestora crește. Cu toate acestea, variabilitatea ridicată a HIV poate duce la apariția de noi tipuri, anticorpi față de care ar putea să nu fie recunoscuți de sistemele de testare existente. În plus, sunt cunoscute cazuri de răspuns umoral atipic al sistemului imunitar al organismului gazdă la virus. Deci, L. Montagnier în 1996 a raportat despre doi pacienți cu SIDA cărora nu li s-au detectat anticorpi specifici în sânge în ultimii ani, diagnosticul a fost pus pe baza datelor clinice și a fost confirmat de laborator doar prin izolarea HPV-1. în cultura celulară. În astfel de cazuri, este necesar să se utilizeze recomandările OMS, conform cărora diagnosticul clinic al infecției cu HIV la adulți și copii este posibil în prezența uneia dintre cele 12 boli care definesc SIDA:

1. candidoza esofagului, traheei, bronhiilor, plămânilor;
2. criptococoză extrapulmonară;
3. criptosporidioza cu diaree mai mult de o luna;
4. leziuni ale citomegalovirusului la orice organ (cu excepția și pe lângă ficatul, splina și ganglionii limfatici la un pacient mai în vârstă de 1 lună):
5. o infecție cauzată de virusul herpes simplex care persistă mai mult de 1 lună la un pacient mai în vârstă de 1 lună;
6. limfom cerebral la un pacient mai mic de 60 de ani;
7. pneumonie interstițială limfocitară la un copil sub 13 ani;
8. infecție diseminată cauzată de bacterii din grupul Mycobacterium avium intracellulare sau M. Kansassii;
9. pneumonie pneumocystis;
10. leucoencefalopatie multifocală progresivă;
11. toxoplasmoza sistemului nervos central la pacienții cu vârsta mai mare de 1 lună.

Prezența uneia dintre aceste boli face posibilă diagnosticarea infecției cu HIV în absența unui test de sânge de laborator pentru prezența anticorpilor la HIV sau chiar atunci când se obține un rezultat seronegativ.

Sursă: Diagnosticare de laborator medical, programe și algoritmi. Ed. prof. Karpishchenko A.I., Sankt Petersburg, Intermedica, 2001

Diagnosticul infecției cu HIV include două etape: stabilirea faptului real al infecției cu HIV și determinarea stadiului bolii. Determinarea stadiului este inextricabil urmată de clarificarea naturii cursului bolii și apoi de formarea prognosticului la acest pacient, precum și de alegerea tacticii de tratament.

După cum știți, diagnosticul oricărei boli infecțioase se bazează pe o comparație a datelor epidemiologice, clinice și de laborator, iar exagerarea valorii unuia dintre grupele acestor date poate duce la erori de diagnostic.

Criterii epidemiologice pentru infectarea cu HIV .

Primul pas în diagnosticarea infecției cu HIV este colectarea unui istoric epidemiologic și a altor date epidemiologice despre pacientul examinat. Lipsa datelor epidemiologice poate complica semnificativ diagnosticul infecției cu HIV și poate împiedica implementarea măsurilor antiepidemice.

Criteriile epidemiologice pot fi uneori decisive în stabilirea unui diagnostic de infecție cu HIV, dar pot avea și o importanță secundară. Criteriul pentru o probabilitate mare de infectare este detectarea la persoana examinată a unor astfel de factori de risc pentru infecție precum transfuzia de sânge de la donator primit de la o persoană infectată cu HIV, nașterea unui copil infectat cu HIV de către femeia examinată. Există o probabilitate mare de infectare în cazul nașterii subiectului dintr-o mamă infectată cu HIV, contact sexual cu o persoană infectată cu HIV, consum parenteral comun de droguri cu o persoană infectată cu HIV. Un anumit risc de infecție se găsește în cazul intervențiilor parenterale fiabile care sunt efectuate cu instrumente care sunt susceptibile de a fi contaminate cu HIV (adică în focare nosocomiale și similare de infecție HIV cu transmitere parenterală a HIV).

Un risc vizibil de infecție poate fi discutat în cazurile în care subiectul raportează relații sexuale sau consumul parenteral de droguri în zonele în care HIV este predominant în rândul grupului de populație căruia îi aparține subiectul.

În același timp, actul sexual și consumul de droguri în zonele cu o prevalență scăzută a infecției cu HIV nu exclude posibilitatea infecției cu HIV.

Absența unor factori de risc de încredere pentru infecția cu HIV poate pune îndoieli asupra datelor de laborator. În astfel de cazuri, se recomandă repetarea testelor de laborator.

Criterii clinice pentru infecția cu HIV.

Diagnosticul precoce al infecției HIV asigură tratarea în timp util a pacientului și desfășurarea măsurilor preventive în focar, prevenind transmiterea neintenționată a virusului de la o persoană infectată la o persoană sănătoasă. În cele din urmă, diagnosticul precoce permite examinarea clinică în timp util, asistența psihologică și reabilitarea socială. Primele succese în tratamentul pacienţilor permit, cu diagnosticul precoce, prelungirea semnificativă a vieţii pacienţilor şi chiar speranţa unei vindecari.

Complexitatea diagnosticului precoce bazat pe tabloul clinic constă în nespecificitatea, polimorfismul simptomelor în stadiul II, ca să nu mai vorbim de absența unei clinici în stadiul I. Cu toate acestea, în toate cazurile de oboseală nemotivată, prezența transpirațiilor nocturne. , cefalee, mai ales pe fondul febrei de scurtă durată (3-10 zile) cu o temperatură de 38-38,50 C, însoțită de amigdalita, sindrom diareic prelungit, pierdere în greutate în timp scurt, este necesar în primul rând excluderea infectie cu HIV. Diagnosticul în această perioadă este ajutat de identificarea unei varietăți de erupții cutanate (pete, papule, rozeole, pustule) sau furunculoză în timpul unei examinări obiective. Prezența limfadenopatiei, chiar și în cazurile de creștere a unui grup de ganglioni, și cu atât mai mult în cazul unuia generalizat, este mai probabil să suspecteze clinic infecția HIV. Boala se caracterizează în special printr-o creștere a ganglionilor limfatici posteriori cervicali, submandibulari, supra- și subclaviei, axilari și ulnari. De regulă, ele cresc în dimensiune până la 2-5 cm în diametru, sunt nedureroase, dens elastice în consistență, se îmbină ocazional într-un conglomerat. Este foarte tipic ca infecția cu HIV să crească mai mult de un ganglion, mai mult de un grup (cu excepția celui inghinal), cu o durată de peste 3 luni.

Adesea, în faza incipientă a bolii, prezența simptomelor psiho-neurologice: anxietate, depresie, mers instabil, scăderea acuității vizuale, crize convulsive cu semne de afectare a sferei psiho-emoționale (tulburări de memorie, uitare, comportament inadecvat, tocire). de emoții). La cele mai caracteristice trăsături Stadiile incipiente ale infecției cu HIV includ:

1. Scădere în greutate mai mică de 10%;

2. Modificări ale pielii și mucoaselor (dermatită seboreică, foliculită, prurigo, psoriazis, infecții fungice ale unghiilor, ulcere bucale recurente, gingivita necrozantă);

3 . Herpes zoster la persoanele sub 50 de ani;

4. Infecții recurente ale tractului respirator superior;

LA stadiu intermediar bolile caracterizate printr-o clinică de suprainfecție extinsă, formată ca urmare a imunodeficienței, sunt cele mai caracteristice:

1 . Pierdere progresivă în greutate peste 10%;

2 . Diaree de origine necunoscută, care durează peste 1 lună;

3 . candidoză orală;

4 . leucoplazie;

5. Tuberculoza pulmonara;

6. Neuropatie periferica;

7. Forme localizate ale sarcomului Kaposi;

8. Diseminarea herpesului zoster;

9. Infecție bacteriană severă, recurentă (pneumonie, sinuzită, piomiozită).

Pentru etapă tarzie, care să permită diagnosticarea infecției cu HIV sau, în orice caz, efectuarea unui diagnostic diferențial, includ:

1. Pneumonie cu Pneumocystis;

2 . Toxoplasmoza;

3. Criptococoză;

4. infecție cu CMV;

5. Herpes simplex;

6. leucoencefalopatie multifocală progresivă;

7. Histoplasmoza;

8. Esofagită cu Candida;

9. infecție MAC;

10. Septicemia cu Salmonella;

11. Tuberculoză extrapulmonară;

12. Limfom, sarcom Kaposi;

13. cașexie;

14. encefalopatie HIV.

În 1988, OMS a propus în scopul diagnosticului clinic să efectueze scorul simptomelor disponibile la un pacient suspectat de infecție cu HIV:

Limfadenopatie generalizată persistentă 0

Modificări ale pielii și mucoaselor 1

Pierdere în greutate 1

Oboseală severă 1

Herpes simplex 2

Diaree care durează mai mult de 1 lună. 4

Febră care durează mai mult de 1 lună. 4

Pierdere în greutate peste 10% 4

Tuberculoza pulmonară 5

Infecție bacteriană recurentă 5

Leucoplazie orală 5

Stomatită, afte bucale 5

Sarcomul Kaposi localizat 8

Cașexia 12

În același timp, se estimează suma punctelor de la 0 la 3, deoarece probabilitatea de infectare cu HIV este foarte mică, 4-11 puncte - boala este probabilă și 12 sau mai mult - foarte probabilă.

În general, diagnosticul clinic al infecției HIV este, în primul rând, diagnosticul spectrului de patologie asociată SIDA la un pacient cu imunodeficiență secundară. Deoarece bolile indicatoare HIV includ 23 de forme nosologice, o abordare sindromică a diagnosticului este cea mai potrivită. Aproape întotdeauna, pacientul are un sindrom de intoxicație generală (slăbiciune nemotivată, letargie, oboseală) care se dezvoltă pe fondul febrei prelungite de grad scăzut sau febrei de origine necunoscută, mai des noaptea și dimineața, însoțită de transpirație abundentă. Sindromul de limfadenopatie periferică generalizată nemotivată este permanent, în 20% este însoțit de hepatosplenomegalie de severitate variabilă. Unul dintre sindroamele principale ale bolii este sindromul patologiei bronho-pulmonare, deși leziuni profunde ale țesutului pulmonar sub formă de pneumonie pneumocystis se dezvoltă în cazurile avansate ale bolii, deoarece pneumocistoza se dezvoltă pe fondul imunodeficienței profunde. Dar cu o durată mai mare de 1 lună, sindromul diareei nemotivate se referă la apariția precoce, se caracterizează prin rezistență la terapia medicamentoasă. Unul dintre sindroamele infecției cu HIV este artralgia ondulată de etiologie necunoscută. Cele mai caracteristice manifestări ale bolii includ sindromul de leziuni ale pielii și mucoaselor, manifestat printr-o erupție maculopapulară nespecifică, eczeme rezistente la terapia cu steroizi și impetigo stafilococic. Manifestările dermatologice includ, de asemenea, leziuni fungice recurente (micoză, candidoză, bacteriene (foliculită, furunculoză, hidroadenită), virale (herpes) ale pielii și mucoaselor. În sfârșit, infecția cu HIV se caracterizează și prin neoplasme, în principal sub formă de sarcom Kaposi și limfom, precum și alte tipuri de tumori.

Prezența la un pacient a cel puțin două clinice și două clinice de laborator (leuco-lifonutropenie, hipogammaglobulinemie) a simptomelor de mai sus permite diagnosticarea infecției cu HIV cu un grad ridicat de încredere. Dar, în același timp, în cazul depistarii a două dintre astfel de sindroame care sunt foarte frecvente la pacienți, cum ar fi febra și limfadenopatiile, care persistă o lună sau mai mult, diaree nemotivată persistentă, scădere în greutate cu peste 10% sau abundentă. transpirații nocturne, dau naștere diagnosticului de stadializare și examinării amănunțite de laborator.

LA etapa 2a boala poate fi suspectată numai prin simptomul limfadenopatiei generalizate persistente la un pacient cu risc sau în prezența unui istoric epidemiologic.

LA etapa 2b(precoce sau ușoară), starea de bine somatică, activitatea normală este încă păstrată. Leziunile pielii și ale mucoaselor nu sunt severe, infecțiile recurente ale tractului respirator nu sunt generalizate, pierderea în greutate nu depășește 10%.

Conform recomandărilor OMS, diagnosticul clinic de încredere al infecției cu HIV la adulți și copii este posibil în prezența uneia dintre cele 12 boli care indică SIDA: 1) candidoza esofagului, traheei, bronhiilor, plămânilor; 2) criptococoză extrapulmonară; 3) criptosporidioza cu diaree mai mult de o luna; 4) afectarea citomegalovirusului oricărui organ (cu excepția și pe lângă ficatul, splina și ganglionii limfatici la un pacient mai în vârstă de 1 lună); 5) infecție cauzată de virusul herpes simplex, care persistă mai mult de 1 lună la un pacient mai în vârstă de 1 lună; 6) Sarcomul Kaposi la un pacient mai mic de 60 de ani; 7) limfom cerebral la un pacient mai mic de 60 de ani; 8) pneumonie interstițială limfocitară la un copil sub 13 ani, 9) infecție diseminată cauzată de bacterii din grupul Mycobacterium avium intracellulare sau M. Kansassii; 10) pneumonie pneumocystis; 11) leucoencefalopatie multifocală progresivă; 12) toxoplasmoza sistemului nervos central la pacienții cu vârsta mai mare de 1 lună. Prezența uneia dintre aceste boli face posibilă diagnosticarea infecției cu HIV în absența unui test imunosorbant serologic legat de enzime sau chiar atunci când se obține un rezultat seronegativ.

Nu mai puțin complexă este diferențierea fazelor bolii, adică. stadializare după criterii clinice. Potrivit experților CDC (SUA), cel mai obiectiv criteriu este numărul de celule T-helper, și nu manifestările clinice, deoarece multe dintre aceste afecțiuni se întâlnesc adesea la persoanele care nu sunt infectate cu HIV. În 1991, Centrul a stabilit că un diagnostic de SIDA poate fi pus dacă: a) persoana infectată are una dintre cele 23 de afecțiuni legate de SIDA sau b) este infectată cu HIV și are mai puțin de 200 de celule CD4+/mm.

Criterii de laborator pentru infecția cu HIV.

Testarea infecției cu HIV este în principal supusă:

2 . Persoanele cu o clinică de esofagită candidoză, candidoză a bronhiilor și plămânilor, coccidiomicoză diseminată sau extrapulmonară, pneumonie pneumocystis, criptococoză extrapulmonară, criptosporidioză cu diaree de mai mult de 1 lună, leziuni de citomegalovirus ale organelor interne, cu excepția ficatului, limfelor, ficatului, limfelor. pacienți mai în vârstă de 6 luni, retinită cu citomegalovirus cu pierderea vederii, infecție herpetică cu ulcere multifocale cu durată mai mare de 1 lună, bronșită, pneumonie sau esofagită, herpes zoster recurent, histoplasmoză diseminată sau extrapulmonară, tuberculoză pulmonară sau extrapulmonară, izosporioză cu durată mai mare decât diarnă. 1 lună, infectii MAC extinse sau extrapulmonare, leucoencefalopatie multifocala progresiva, toxoplasmoza creierului, septicemia cu salmonella, sarcom Kaposi, limfom, pneumonie interstitiala limfoida (la copii)

În prezent, pentru diagnosticul de laborator al infecției HIV sunt utilizate diverse metode de detectare a HIV, antigene HIV și material genic HIV, precum și metode de detectare a anticorpilor la HIV. Toate aceste metode au eficiență diferită, necesită echipamente diferite și niveluri diferite de pregătire a personalului. Rezultatele acestor studii necesită o interpretare competentă.