Ko nozīmē ifa hiv 1 2. Mūsdienu HIV infekcijas diagnostikas metodes. Kad tiek pasūtīts pētījums?

Vispārīga informācija par pētījumu

HIV (cilvēka imūndeficīta vīruss) ir retrovīrusu saimes vīruss, kas inficē cilvēka imūnsistēmas šūnas (CD4, T-helpers). Izraisa AIDS.

HIV-1 ir visizplatītākais vīrusa veids, kas visbiežāk sastopams Krievijā, ASV, Eiropā, Japānā un Austrālijā (parasti B apakštips).

HIV-2 ir rets veids, izplatīts Rietumāfrikā.

Cilvēka imūndeficīta vīrusa diagnostikai tiek izmantota kombinētā ceturtās paaudzes testu sistēma, kas spēj noteikt HIV infekciju jau 2 nedēļas pēc vīrusa nonākšanas asinīs, savukārt pirmās paaudzes testu sistēmas to dara tikai 6-12 nedēļas. pēc inficēšanās.

Šī kombinētā HIV testa priekšrocība ir tā, ka, izmantojot antivielas pret HIV-1 p24 kā reaģentus, tiek atklāts specifiskais p24 antigēns (vīrusa kapsīda proteīns), ko ar šo testu var noteikt jau 1-4 nedēļas pēc inficēšanās. i., pat pirms serokonversijas, kas ievērojami samazina "loga periodu".

Turklāt ar šādu HIV testu asinīs tiek konstatētas antivielas pret HIV-1 un HIV-2 (izmantojot antigēna-antivielu reakciju), kuras tiek ražotas pietiekamā daudzumā, lai pēc 2-8 nedēļām no brīža noteiktu testu sistēmu. no infekcijas.

Pēc serokonversijas antivielas sāk saistīties ar p24 antigēnu, kā rezultātā tiek iegūts pozitīvs HIV antivielu tests un negatīvs p24 tests. Tomēr pēc kāda laika asinīs vienlaikus tiks konstatētas gan antivielas, gan antigēns. Uz termināla stadija AIDS tests pret HIV antivielām var dot negatīvu rezultātu, jo tiek traucēts antivielu veidošanās mehānisms.

HIV infekcijas stadijas

1. Inkubācijas periods jeb “seronegatīvā loga periods” ir laiks no inficēšanās brīža līdz vīrusu aizsargājošo antivielu veidošanās asinīs, kad HIV antivielu testi ir negatīvi, bet cilvēks jau var pārnest vīrusu uz citi cilvēki. Šī perioda ilgums ir no 2 nedēļām līdz 6 mēnešiem.
2. Akūtas HIV infekcijas periods notiek vidēji 2-4 nedēļas pēc inficēšanās un ilgst aptuveni 2-3 nedēļas. Šajā posmā dažiem cilvēkiem vīrusa aktīvas replikācijas dēļ var attīstīties nespecifiski gripai līdzīgi simptomi.
3. Latentā stadija ir asimptomātiska, bet tās laikā pakāpeniski samazinās imunitāte un palielinās vīrusa daudzums asinīs.
4. AIDS (iegūtā imūndeficīta sindroms) ir HIV infekcijas beigu stadija, kurai raksturīgs smags imūnsistēmas nomākums, kā arī blakusslimības, encefalopātija vai vēzis.

Neskatoties uz to, ka HIV infekcija ir neārstējama, mūsdienās pastāv ļoti aktīva pretretrovīrusu terapija (ART), kas var būtiski paildzināt HIV inficēta cilvēka mūžu un uzlabot tā kvalitāti.

Šim testam ir īpaši augsta diagnostiskā vērtība, ja HIV infekcija notikusi īsi pirms pārbaudes laika (2-4 nedēļas).

Kam tiek izmantots pētījums?

Analīze tiek izmantota agrīnai HIV diagnostikai, kas palīdz novērst vīrusa tālāku pārnešanu uz citiem cilvēkiem, kā arī savlaicīgu pretretrovīrusu terapijas uzsākšanu un tādu slimību ārstēšanu, kas veicina HIV infekcijas progresēšanu.

Kad ir plānots pētījums?

• Ar nepārprotamiem neskaidras etioloģijas simptomiem (2-3 nedēļas): subfebrīla temperatūra, caureja, svīšana naktī, pēkšņs svara zudums, paaugstināts limfmezgli.
• Ar atkārtotu herpes infekciju, vīrusu hepatītu, pneimoniju, tuberkulozi, toksoplazmozi.
• Ja pacients cieš no seksuāli transmisīvām slimībām (sifiliss, hlamīdijas, gonoreja, dzimumorgānu herpes, bakteriāla vaginoze).
• Ja pacientam ir bijis neaizsargāts vaginālais, anālais vai orālais sekss ar vairākiem seksuālajiem partneriem, jaunu partneri vai partneri, par kura HIV statusu pacients nav pārliecināts.
• Kad pacientam tika veikta asins pārliešanas procedūra (lai gan inficēšanās gadījumi šādā veidā ir praktiski izslēgti, jo asinis tiek rūpīgi pārbaudītas attiecībā uz vīrusu daļiņu klātbūtni un tiek pakļautas īpašai termiskai apstrādei).
• Ja pacients ir injicējis zāles, izmantojot nesterilus instrumentus.
• Grūtniecība/Grūtniecības plānošana (Azidotimidīna lietošana grūtniecības laikā, ķeizargrieziens, lai izvairītos no vīrusa pārnešanas bērnam brīdī, kad tas iziet cauri dzemdību kanālam, un nebarošana ar krūti samazina HIV pārnešanas risku no mātes bērnam no 30% līdz 1%).
• Nejauša injekcija ar šļirci vai citu priekšmetu (piemēram, medicīnisku instrumentu), kas satur inficētas asinis (šādos gadījumos infekcijas iespējamība ir ārkārtīgi zema).

Apraksts

Apmācība

Indikācijas

Rezultātu interpretācija

Apraksts

Noteikšanas metode Enzīmu imūnanalīze (ELISA).

Materiāls tiek pētīts Serums

Iespējama mājas vizīte

Kombinēta antivielu noteikšana pret HIV 1. un 2. tipa un HIV p24 antigēnu, kvalitatīvs tests.

Uzmanību. Pozitīvu un šaubīgu reakciju gadījumā rezultāta izsniegšanas termiņš var tikt pagarināts līdz 10 darba dienām. HIV (cilvēka imūndeficīta vīruss), kas izraisa AIDS (iegūtā imūndeficīta sindromu), pieder retrovīrusu ģimenei. Tas tiek izplatīts no cilvēka uz cilvēku, izmantojot piesārņotas adatas un šļirces intravenoza ievadīšana zāles vai ārstnieciskas procedūras, dzimumakts, gan heteroseksuāls, gan homoseksuāls. Vīrusa pārnešana var notikt, pārliejot inficētas asinis un asins pagatavojumus, ziedojot orgānus vai sēklu šķidrumu, kā arī veselības aprūpes darbiniekiem, ja tie ir ievainoti ar inficētām adatām vai instrumentiem. HIV infekcija ir iespējama, pārnēsājoties no inficētas mātes bērnam (vertikāls ceļš), lai gan mūsdienu profilakses metodes, izmantojot pretretrovīrusu terapiju, ja tiek ievēroti visi ieteikumi, var samazināt šo risku līdz minimumam.

Vīrusa mijiedarbības process ar šūnu ietver vairākus posmus: vīrusa saistīšanās ar šūnu, tā atbrīvošanās no čaumalas, iekļūšana citoplazmā, DNS sintēze no vīrusa RNS un vīrusa DNS integrācija genomā. no saimniekšūnas. Pēc tam sākas latentā infekcijas stadija. Šajā stāvoklī provīrusu DNS var pastāvēt kādu laiku, neuzrādot aktivitāti un neietekmējot saimniekšūnas dzīvībai svarīgo aktivitāti. Kamēr nav vīrusu proteīnu ekspresijas, nav imūnās atbildes pret vīrusu. Antivielas pret HIV, kas raksturo organisma imūnreakciju, parādās pēc vīrusa DNS aktivizācijas un vīrusa aktīvās reprodukcijas sākuma. Ilgums latentais periods ir atkarīgs no vairākiem faktoriem, tostarp organisma individuālajām ģenētiskajām īpašībām.

Antivielas pret HIV var parādīties, sākot ar otro nedēļu pēc inficēšanās; to saturs palielinās 2-4 nedēļu laikā un saglabājas daudzus gadus. 90-95% inficēto tie parādās pirmajos trīs mēnešos pēc inficēšanās, 5-9% - laika posmā no trim līdz sešiem mēnešiem, 0,5-1% - vēlāk.

Pirmajās inficēšanās nedēļās, pat pirms antivielu parādīšanās pret vīrusu (t.i., pirms serokonversijas), seruma vai plazmas paraugos var noteikt HIV antigēnu, tostarp tā p24 kapsīda proteīna, klātbūtni. Vēlāk, pēc serokonversijas, tas parasti kļūst nenosakāms.

Ceturtās paaudzes kombinētie testi, piemēram, HIV Ag/Ab Combo tests (Architect, Abbott), nosaka gan HIV 1. un 2. tipa antivielas, gan HIV p24 antigēnu, ļaujot laikus noteikt infekciju. INVITRO laboratorijā HIV infekcijas noteikšanai izmantotā skrīninga testa īpatnības ietver pētījuma augsto specifiku (> 99,5%); Testa 100% jutība pret antivielām, kas raksturīgas serokonversijas periodam, un testa jutība pret p24 antigēnu ir aptuveni 18 pg/ml.

HIV laboratoriskās pārbaudes procedūru stingri reglamentē Krievijas Federācijas Veselības ministrijas rīkojumi, un tā ietver HIV antivielu klātbūtnes skrīninga (skrīninga) pētījuma stadiju, izmantojot enzīmu imūnanalīzes (ELISA) metodes, kas apstiprinātas lietošanai. , un pārbaudes (apstiprinoša) detalizētāka pētījuma stadija pilsētas AIDS centra laboratorijā. Jāņem vērā, ka pat labākās skrīninga ELISA sistēmas negarantē 100% specifiskumu, tas ir, pastāv zināma iespēja iegūt nespecifiskus, viltus pozitīvus rezultātus, kas saistīti ar pacienta asins seruma īpašībām. Tāpēc pozitīvs skrīninga ELISA rezultāts var neapstiprināties apstiprinošajos testos, pēc kuriem pacientam tiks piešķirts negatīvs vai nenoteikts rezultāts. Ja apstiprinošā pētījuma rezultāts ir nenoteikts, testēšana ir jāatkārto dinamikā pēc 2-3 nedēļām.

HIV infekcijas laboratoriskajai diagnostikai bērniem, kas dzimuši HIV inficētām mātēm, ir savas īpatnības. Mātes antivielas pret HIV (IgG klase) var cirkulēt viņu asinīs līdz 18 mēnešiem no dzimšanas brīža. Tas, ka jaundzimušajiem nav antivielu pret HIV, nenozīmē, ka vīruss nav šķērsojis placentas barjeru. HIV inficētu māšu bērniem 36 mēnešu laikā pēc dzimšanas tiek veikta laboratoriskā diagnostika.

Apmācība

Īpaša sagatavošana nav nepieciešama. Asins paraugus ieteicams ņemt ne agrāk kā 4 stundas pēc pēdējās ēdienreizes. Ar vispārīgi ieteikumi sagatavoties pētniecībai var atrast. Testu HIV antigēna un antivielu noteikšanai vēlams veikt ne agrāk kā divas nedēļas pēc iespējamās inficēšanās, negatīva rezultāta gadījumā atkārtojot pēc trim un sešām nedēļām. Pētījumu pieteikumu reģistrācija SIA INVITRO notiek pēc pases vai to aizstājoša dokumenta (migrācijas karte, pagaidu reģistrācija dzīvesvietā, dienesta apliecība, izziņa no pasu nodaļas pases nozaudēšanas gadījumā, reģistrācijas karte no viesnīcas). Iesniegtajā dokumentā jābūt informācijai par pagaidu vai pastāvīgu reģistrāciju Krievijas Federācijas teritorijā un fotogrāfijai. Ja pases (to aizvietojoša dokumenta) nav, pacientam ir tiesības iesniegt anonīmu iesniegumu par biomateriāla piegādi. Ar anonīmu izmeklēšanu iesniegumam un no klienta saņemtajam biomateriāla paraugam tiek piešķirts numurs, kas zināms tikai pacientam un medicīniskajam personālam, kurš veicis pasūtījumu. ! Anonīmi veikto pētījumu rezultātus nevar iesniegt hospitalizācijai, profesionālajām pārbaudēm, un tie nav jāreģistrējas ORUIB.

Indikācijas iecelšanai amatā

• Limfmezglu palielināšanās vairāk nekā divās zonās.
• Leikopēnija ar limfopēniju.
• Nakts svīšana.
• Pēkšņs svara zudums nezināma iemesla dēļ.
• Caureja vairāk nekā trīs nedēļas nezināma iemesla dēļ.
• Nezināma iemesla drudzis.
• Grūtniecības plānošana.
• Pirmsoperācijas sagatavošana, hospitalizācija.
• Sekojošu infekciju vai to kombināciju identificēšana: tuberkuloze, atklāta toksoplazmoze, bieži recidivējoša herpesvīrusa infekcija, kandidoze iekšējie orgāni, recidivējoša herpes zoster neiralģija, ko izraisa mikoplazmas, pneimocistis vai legionellas pneimonija.
• Kapoši sarkoma jaunībā.
• Ikdienas sekss.

Rezultātu interpretācija

Pārbaudes rezultātu interpretācija satur informāciju ārstējošajam ārstam, un tā nav diagnoze. Šajā sadaļā sniegto informāciju nevajadzētu izmantot pašdiagnostikai vai pašapstrādei. Precīzu diagnozi nosaka ārsts, izmantojot gan šīs izmeklēšanas rezultātus, gan nepieciešamo informāciju no citiem avotiem: anamnēzi, citu izmeklējumu rezultātus u.c.

Mērvienības Neatkarīgajā laboratorijā INVITRO: kvalitatīvais tests. Rezultātu noformēšanas forma: ja nav antivielu pret HIV 1 un 2 un p24 antigēnu, atbilde ir “negatīva”. Ja skrīninga ELISA testā tiek konstatētas antivielas pret HIV vai antigēns, seruma paraugs tiek nosūtīts analīzei ar apstiprinošu imūnblota metodi uz pilsētas AIDS centru, kas pārbauda pozitīvos un nenoteiktos rezultātus.

Pozitīvs rezultāts:

1. HIV infekcija;
2. kļūdaini pozitīvs rezultāts, kam nepieciešami atkārtoti vai papildu pētījumi*);
3. pētījums nav informatīvs bērniem līdz 18 mēnešu vecumam, kas dzimuši HIV inficētām mātēm.

*Skrīninga testu sistēmas HIV 1 un 2 antivielu un HIV 1 un 2 antigēnu (HIV Ag/Ab Combo, Abbott) specifika pēc reaģentu ražotāja aplēsēm ir aptuveni 99,6% gan vispārējā populācijā, gan grupā. pacienti ar iespējamiem traucējumiem (HBV, HCV, masaliņām, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E.coli, Chl.trach. u.c. infekcijām, autoimūnām patoloģijām (t.sk. reimatoīdais artrīts, antinukleāro antivielu klātbūtne), grūtniecība, paaugstināts IgG, IgM līmenis, monoklonāla gammopātija, hemodialīze, daudzkārtējas asins pārliešanas).

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA — angļu valodā) ienāca praktiskās medicīnas dzīvē kaut kur citur pagājušā gadsimta 60. gados. Viņa sākotnējais uzdevums bija histoloģiskie pētījumi zinātniskiem nolūkiem, kas beidzās ar dzīva organisma šūnu antigēnās struktūras meklēšanu un identificēšanu.

ELISA metodes pamatā ir specifisku (AT) un radniecīgu antigēnu (AG) mijiedarbība ar antigēna-antivielu kompleksa veidošanos, ko nosaka, izmantojot fermentu. Šis fakts noveda zinātniekus uz domu, ka šo metodi var izmantot diagnostikas nolūkos, lai identificētu dažādu klašu specifiskus imūnglobulīnus, kas iesaistīti imūnreakcijā pret konkrētu infekciju. Un tas bija izrāviens klīniskajā laboratorijas diagnostikā!

Metode sāka aktīvi izmantot tikai 80. gadu sākumā, un pēc tam galvenokārt specializētās iestādēs. Pirmie ar enzīmu saistītie imūnsorbcijas analizatori tika piegādāti asins pārliešanas centriem un stacijām, infekcijas un veneriskajām slimnīcām, jo ​​Āfrikas kontinentā dzimušais briesmīgais AIDS parādījās pie mums un nekavējoties pievienojās "vecajām" infekcijām, tāpēc bija jāveic tūlītēji pasākumi. lai diagnosticētu un meklētu terapeitiskās zāles, kas viņu ietekmē.

ELISA metodes darbības joma

Enzīmu imūnanalīzes iespējas ir patiesi plašas. Tagad ir grūti iedomāties, kā var iztikt bez šādiem pētījumiem, kurus burtiski izmanto visās medicīnas nozarēs. Šķiet, ka ELISA var darīt onkoloģijā? Izrādās, ka var. Un daudz. Analīzes spēja atrast noteiktiem ļaundabīgo audzēju veidiem raksturīgos marķierus ir pamatā agrīnai audzēja atklāšanai, kad tas vēl nav atklāts ar citām metodēm tā mazā izmēra dēļ.

Mūsdienu klīniskajā laboratoriskajā diagnostikā (CDL) papildus audzēju marķieriem ir ievērojams ELISA paneļu arsenāls, kas izmanto dažādu patoloģisku stāvokļu (infekcijas procesu, hormonālo traucējumu) diagnostiku un farmaceitisko zāļu monitoringu, lai noteiktu to ietekmi uz pacienta stāvokli. ķermenis un, starp citu, ne tikai cilvēks. Šobrīd veterinārajā dienestā plaši izmanto fermentu imūntestu, jo arī "mūsu mazākie brāļi" ir uzņēmīgi pret daudzām slimībām, ar kurām reizēm ļoti cieš.

Tādējādi ELISA, pateicoties tās jutīgumam un specifiskumam, no asins parauga, kas ņemts no vēnas, var noteikt:

• Hormonālais stāvoklis (vairogdziedzera un virsnieru hormoni, dzimumhormoni);
• Vīrusa klātbūtne un bakteriāla infekcija(HIV, B un C, hlamīdijas, sifiliss, un, kā arī daudzas citas slimības, ko izraisa patogēni mikroorganismi);
• Mikroorganismu dzīvībai svarīgās aktivitātes pēdas, kas ierosināja infekcijas procesu, kas beidzās veiksmīgi un pārgāja imūnās atbildes veidošanās stadijā pret šo patogēnu. Šādas pēdas, tas ir, antivielas, daudzos gadījumos paliek cirkulēt asinīs uz mūžu, kas pasargā cilvēku no atkārtotas inficēšanās.

Kāda ir IF būtība?

Enzīmu imūnanalīzes metode ļauj noteikt ne tikai paša patogēna klātbūtni (kvalitatīvā analīze), bet arī tā kvantitatīvo saturu pacienta asins serumā.

Vīrusu vai baktēriju deva būtiski ietekmē infekcijas procesa gaitu un tā iznākumu, tāpēc kvantitatīvā analīze ir nozīmīga slimību diagnostikā un ārstēšanā. dažādas formas un posmi.

Tomēr, zinot ar enzīmiem saistītos imūnsorbcijas testus kā ELISA metodi, mēs pat nedomājam par to, kā tas spēj aptvert tik plašu mikroorganismu loku, kas apdzīvo mūsu planētu, no kuriem daudzi rada tiešus draudus cilvēku veselībai un dzīvībai un dzīvnieki. Fakts ir tāds, ka ELISA ir daudz iespēju (nekonkurējoša un konkurējoša - tieša un netieša), no kurām katra atrisina savu problēmu un tādējādi ļauj veikt mērķtiecīgu meklēšanu.

Lai noteiktu vienas vai citas klases imūnglobulīnus, tiek izmantots tradicionāls 96 iedobju polistirola panelis (tablete), kura iedobēs cietajā fāzē koncentrējas adsorbētie rekombinantie proteīni. Antivielas vai antigēni, kas iekļuvuši iedobē ar asins serumu, atrod “pazīstamu” objektu un veido ar to kompleksu (AG - AT), kas, fiksējot fermenta konjugātu, izpaudīsies kā iedobes krāsas maiņa. lasot rezultātus.

Enzīmu imūntests tiek veikts ar noteiktas specifikas testa sistēmām, kas izgatavotas īpašās laboratorijās un aprīkotas ar visiem nepieciešamajiem reaģējošajiem komponentiem. Pētījumus var veikt, izmantojot paplāksnes ("paplāksnes") un nolasīšanas spektrofotometrus, kur lielākā daļa ir saistīts ar roku darbu. Pilnībā automātiskajās iekārtās, kas atbrīvo laborantu no vienmuļas instilācijas, mazgāšanas un citiem ikdienas darbiem, protams, strādāt ir ātrāk un ērtāk, taču ne visas laboratorijas var atļauties tādu greznību un turpināt strādāt vecmodīgi. - uz pusautomātiskajām ierīcēm.

ELISA rezultātu interpretācija ir ārsta pienākums laboratorijas diagnostika, savukārt gandrīz visām imūnķīmiskajām reakcijām raksturīgā īpašība sniegt kļūdaini pozitīvas vai viltus negatīvas atbildes ir obligāti jāņem vērā.

Video: mūsdienu enzīmu imūntests

ELISA rezultāti uz sifilisa piemēru

ELISA ir piemērota visu veidu noteikšanai, un turklāt to izmanto skrīninga pētījumos. Analīzei tiek izmantotas pacienta venozās asinis, kas ņemtas tukšā dūšā. Darbā tiek izmantotas plāksnes ar noteiktu specifiskumu (AT klases A, M, G) vai kopējās antivielas.

Ņemot vērā, ka sifilisa antivielas tiek ražotas noteiktā secībā, ELISA var viegli atbildēt uz jautājumu, kad infekcija notikusi un kurā stadijā ir process, un iegūto rezultātu dekodēšanu var uzrādīt šādā formā:

• IgM norāda uz infekcijas procesa ilgumu (var parādīties hronisku iekaisuma slimību saasināšanās laikā);
• IgA norāda, ka infekcija notikusi vairāk nekā pirms mēneša;
• IgG norāda, ka infekcija ir pilnā sparā vai nesen ārstēta, ko viegli noskaidrot, apkopojot anamnēzi.

Pārbaudot sifilisu, negatīvās iedobes (un negatīvā kontrole) paliks bezkrāsainas, savukārt pozitīvajai (tāpat kā pozitīvajai kontrolei) būs spilgti dzeltena krāsa testa laikā pievienotā hromogēna krāsas maiņas dēļ. Tomēr krāsas intensitāte ne vienmēr atbilst kontrolei, tas ir, tā var būt nedaudz bālāka vai nedaudz dzeltenīga. Tie ir apšaubāmi rezultāti, kas parasti ir pakļauti atkārtotai pārbaudei, obligāti ņemot vērā spektrofotometrā iegūtos kvantitatīvos rādītājus, taču kopumā krāsa ir tieši proporcionāla imūnkompleksu (saistīto antigēnu un antivielu) skaitam. viens otram).

Aizraujošākais no enzīmu imūntestiem – HIV ELISA

Analīze par, iespējams, vairāk nekā citas, interesē plašu iedzīvotāju loku, jo vēl nevar droši apgalvot, ka daudzas sociālās problēmas (prostitūcija, narkomānija utt.) ir pazudušas. Diemžēl HIV skar ne tikai šīs sabiedrības daļas, inficēties var dažādos apstākļos, kas nav saistīti ar seksuālo izlaidību vai narkotiku lietošanu. Bet, ja ir nepieciešamība veikt HIV testu, tad nevajag baidīties, ka par šādas laboratorijas apmeklējumu uzzinās visi apkārtējie. Tagad HIV inficētos cilvēkus aizsargā likums, un tie, kuriem ir šaubas, var vērsties anonīmos birojos, kur var atrisināt problēmu, nebaidoties no publicitātes un nosodījuma.

Fermentu imūnanalīze, ko izmanto HIV infekcijas diagnosticēšanai, ir viens no primārajiem standarta pētījumiem, kas tomēr prasa īpašus nosacījumus, jo tēma ir ļoti jutīga.

Ir lietderīgi veikt HIV ELISA testu pēc seksuāla kontakta, asins pārliešanas, citām medicīniskām procedūrām, kas saistītas ar infekciju, kā arī inkubācijas perioda beigās (“seronegatīvais logs”), taču jāņem vērā, ka šajā laika posmā nav nemainīgs. Tas var beigties pēc 14-30 dienām, vai arī tas var ilgt līdz sešiem mēnešiem, tāpēc vidējā vērtība tiek uzskatīta par intervālu no 45 līdz 90 dienām. Uz HIV asinis pāriet tāpat kā citas infekcijas - no vēnas tukšā dūšā. Rezultāti būs gatavi atkarībā no materiāla uzkrāšanās laboratorijā un tās noslodzes (no 2 līdz 10 dienām), lai gan lielākā daļa laboratoriju sniedz atbildi tajā pašā vai nākamajā dienā.

Ko var sagaidīt no HIV rezultātiem?

ELISA HIV infekcijas noteikšanai nosaka antivielas pret diviem vīrusa veidiem: HIV-1 (biežāk Krievijā un citās Eiropas un Āzijas valstīs) un HIV-2 (biežāk Rietumāfrikā).

HIV ELISA uzdevums ir meklēt G klases antivielas, kas tiek konstatētas visās testa sistēmās, bet vēlākā periodā, un A un M klases antivielas, kas tiek atklātas uz jaunās paaudzes rekombinanto testu komplektiem, kas ļauj atrast antivielas uz visvairāk agrīnās stadijas (inkubācijas periods– seronegatīvais logs). No ELISA var sagaidīt šādas atbildes:

1. Primārais pozitīvs rezultāts: asinis atkārtoti pārbauda viena un tā paša tipa, bet, ja iespējams, citas sērijas testu sistēmā un to veic cita persona (laborants);
2. Atkārtota (+) ietver jaunu asins paraugu ņemšanu no pacienta, kura pētījums ir līdzīgs primārajai analīzei;
3. Nākamais pozitīvais rezultāts tiek pakļauts atsauces analīzei, kurā tiek izmantoti ļoti specifiski testa komplekti (2-3 gab.);
4. Pozitīvs rezultāts abās (vai trijās) sistēmās tiek nosūtīts uz imūnblotēšanu (tas pats ELISA, bet tiek veikts atsevišķi īpaši augstas specifikācijas testu komplektiem).

Secinājums par HIV infekciju tiek izdarīts, tikai pamatojoties uz imūnblotēšanu. Saruna ar inficēto personu notiek pilnīgi konfidenciāli. Par medicīnas noslēpumu izpaušanu Krievijā, kā arī citās valstīs draud kriminālsods.

Īpašu popularitāti ir ieguvuši arī hlamīdiju un citomegalovīrusu testi ar enzīmu imūntestu, jo tie ļauj noteikt inficēšanās laiku, slimības stadiju un terapeitisko pasākumu efektivitāti.

Ievada laikā iespējams novērot arī dažādu klašu antivielu parādīšanos. dažādās fāzēs patoloģisks stāvoklis ko izraisa infekcijas izraisītājs:

• IgM var noteikt jau septiņas dienas pēc inficēšanās;
• IgA norāda, ka infekcija organismā dzīvo vairāk nekā mēnesi;
• IgG apstiprina hlamīdiju diagnozi, palīdz uzraudzīt ārstēšanu un noteikt tās efektivitāti. Jāņem vērā, ka G klases antivielas saglabājas un cirkulē organismā neatkarīgi no slimības ilguma, tāpēc pareiza dekodēšana analīzē ir jāņem vērā atsauces vērtības (normas), kas, starp citu, katram CDL ir atšķirīgas: ņemot vērā testa sistēmas zīmolu un komplektā iekļauto reaģentu specifiku. Normas vērtības tiek ievadītas veidlapā blakus ELISA rezultātam.

Runājot par to, šeit tas ir nedaudz savādāk: M klases antivielas parādās apmēram pusotra mēneša laikā, tas ir, pozitīvs rezultāts (IgM +) kļūst primārās infekcijas fāzē vai latentas infekcijas reaktivācijas laikā un saglabājas no 4 mēnešiem līdz sešiem mēnešiem.

G klases antivielu klātbūtne ir raksturīga primārās slimības sākumam akūta infekcija vai atkārtota inficēšanās. Analīze norāda, ka vīruss ir klāt, bet nesniedz informāciju par infekcijas procesa stadiju. Tikmēr grūtības sagādā arī IgG titra normas noteikšana, jo tas pilnībā ir atkarīgs no konkrētā cilvēka imūnsistēmas stāvokļa, ko tomēr nosaka G klases imūnglobulīnu noteikšana. nepieciešams, lai novērtētu G klases antivielu spēju mijiedarboties ar CMV, lai vēlāk to “neitralizētu” (AT aviditāte). Sākotnējā slimības stadijā IgG ļoti vāji saistās ar vīrusa antigēniem (zema aviditāte), un tikai tad tie sāk izrādīt aktivitāti, tāpēc mēs varam runāt par antivielu aviditātes palielināšanos.

Par enzīmu imūntesta priekšrocībām varam runāt ilgi, jo ar šo metodi ir izdevies atrisināt daudzas diagnostikas problēmas, izmantojot tikai venozās asinis. Nav nepieciešama ilga gaidīšana, raizes un problēmas ar materiāla ņemšanu pētniecībai. Turklāt ELISA testu sistēmas turpina pilnveidoties, un nav tālu diena, kad tests nodrošinās 100% rezultāta ticamību.

Video: Maskavas Valsts medicīnas universitātes mācību filma. Sečenovs par ELISA pamatiem

Patenta RU 2283497 īpašnieki:

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģijas un medicīnas jomu. Enzīmu imūndeficīta testa sistēma, lai identificētu antivielu spektru pret cilvēka imūndeficīta vīrusu (HIV) pirmā un otrā tipa, pirmā tipa O grupai un antigēna noteikšanai cilvēka imūndeficīta vīrusa pirmajam tipam p24 ietver imūnsorbentu. uz cilvēka imūndeficīta vīrusa antigēniem, kas pārstāv gp41 (env HIV-1 un HIV-2 grupa O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), antivielas pret HIV antigēnu 1 p24 , un noteikšanas reaģenti, savukārt iepriekš minētie HIV antigēni un HIV antivielas tiek sorbēti dažādās plātņu iedobēs enzīmu imūnanalīzei, bet sorbcijai tiek izmantotas 96 iedobju polistirola saliekamās vai nesaliekamās plāksnes. Izgudrojums nodrošina paaugstinātu jutību, vienkāršošanu, rezultātu vērtēšanas subjektivitātes izslēgšanu. 1 z.p. f-ly, 10 tab., 1 ill.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģijas un medicīnas jomu. Lietošana: diferencēta visu klašu specifisko antivielu noteikšana pret cilvēka imūndeficīta vīrusa 1. un 2., HIV 1 O grupas un HIV 1 p24 antigēna proteīniem.

Būtība: enzīmu imūntestu sistēmas iegūšana visu klašu antivielu spektra noteikšanai pret atsevišķiem proteīniem un HIV 1 un 2, HIV 1 O grupas un HIV 1 p24 antigēniem asins serumā (plazmā), imūnglobulīniem un asins preparātiem, lai identificētu. antivielu spektrs pret HIV 1 un 2, HIV 1 O grupa, HIV 1 p24 antigēna noteikšana un pozitīvu vai nenoteiktu HIV 1 un 2 antivielu, HIV 1 grupas O un HIV 1 p24 antigēnu skrīninga rezultātu apstiprināšana.

IZGUDROJUMA APRAKSTS

HIV infekcijas laboratoriskā diagnostika balstās uz trīs jomām: a) HIV un tā sastāvdaļu indikāciju; b) HIV antivielu noteikšana; c) imūnsistēmas izmaiņu noteikšana. No esošajām laboratoriskās diagnostikas metodēm visizplatītākās ir seroloģiskās metodes - vīrusu antigēnu antivielu noteikšana.

Lai noteiktu antivielas HIV infekcijas gadījumā, galvenokārt izmanto ar enzīmu saistīto imūnsorbcijas testu (ELISA) un imūnblotēšanu (IB). ELISA pamatā ir vīrusu antigēnu imobilizācija uz plāksnēm, kas saista pacienta antivielas, un antigēnu-antivielu kompleksu nosaka, izmantojot mārrutku peroksidāzi konjugētas peles monoklonālās antivielas pret cilvēka imūnglobulīniem G un M. Metode ir diezgan specifiska un jutīga un ļauj atklāt vīrusam specifiskās antivielas 95% pacientu. Atlikušie 5% gadījumu rodas infekcijas sākumposmā, kad asins serumā vēl ir maz antivielu, vai slimības beigu fāzēs, kad organisms vairs nespēj sintezēt antivielas sakarā ar strauju asins seruma izsīkumu. imūnsistēma. Iespējami arī viltus pozitīvi ELISA rezultāti, galvenokārt pacientiem ar autoimūnām un onkoloģiskām slimībām, kā arī Eshptein-Barr vīrusa izraisītām infekcijām. Šajā gadījumā rodas antivielu krusteniskā reakcija pret reimatoīdo faktoru, Epšteina-Barra vīruss vai antigēnu determinantiem, kas ir līdzīgi galvenajiem histokompatibilitātes kompleksa 1. un 2. klases proteīniem (HLA-4 un DQW3) un spēj saistīties ar HIV antigēniem. Viltus pozitīvus rezultātus bieži novēro grūtniecēm un gados vecākiem cilvēkiem. Neuzticamu rezultātu cēlonis var būt arī hemolīze, lipēmija, serumu bakteriālais piesārņojums.

Šajā sakarā ir ierosinātas un izmantotas vairākas metodes, lai pārbaudītu antivielu noteikšanas rezultātu specifiku. No šīm metodēm visbiežāk izmantotā reakcija ir "imūnblots" modifikācijā "Western Blot". Metodes būtība ir šāda: pirmajā posmā HIV proteīnus atdala pēc molekulmasas, izmantojot poliakrilamīda gēla elektroforēzi. Tam seko elektroforētiskā pārnešana no poliakrilamīda gēla uz nitrocelulozes membrānas virsmu. Šādā veidā pārnestos antigēnus uz membrānas nosaka, izmantojot netiešo analīzi: membrānu inkubē ar testa materiālu; saturošās antivielas saistās ar HIV antigēniem, kas pārnesti uz nitrocelulozes membrānu, pēc tam membrānas sloksnes inkubē ar konjugātu; veidojoties antigēna-antivielu kompleksam, tam pievienojas konjugāts, pēc atmazgāšanas no konjugāta un inkubācijas ar substrātu notiek to nitrocelulozes sekciju iekrāsošanās, kur veidojās antigēna-antivielas-konjugāta komplekss. Zīmējumā parādīti pozitīvu, vāji pozitīvu un negatīvu imūnblota rezultātu piemēri.

Ar HIV-1 un HIV-2 inficētu personu serumā tiek konstatētas antivielas pret šādiem proteīniem (p) un glikoproteīniem (gp): A tabula.

B tabulā ir norādīti PVO un Krievijas AIDS profilakses un kontroles centra ieteiktie imūnblotēšanas rezultātu novērtēšanas kritēriji.

Pamatojoties uz PVO kritērijiem, serumus uzskata par pozitīviem, ja ar IB metodi tiek noteiktas antivielas pret jebkuriem diviem HIV-1 apvalka proteīniem. Ja notiek reakcija tikai ar vienu no apvalka proteīniem (gp160, gp120, gp41), kombinācijā ar reakciju ar citiem proteīniem vai bez tā, rezultāts tiek uzskatīts par apšaubāmu. Saskaņā ar Krievijas Federācijas Veselības ministrijas AIDS profilakses un kontroles federālā zinātniskā un metodiskā centra datiem, serumus ir iespējams interpretēt kā pozitīvus pat tad, ja ir antivielas tikai pret vienu apvalka proteīnu.

Antivielu noteikšana pret p24 antigēnu var norādīt uz serokonversijas sākuma periodu, jo antivielas pret šo proteīnu parādās pirmās. Pozitīvas reakcijas ar gag un pol proteīniem bez reakcijas ar env proteīniem var atspoguļot agrīnas serokonversijas stadiju, kā arī norādīt uz HIV-2 infekcijas klātbūtni vai nespecifisku reakciju.

Imunoblotēšanas kā ekspertu metodes izmantošanai HIV diagnosticēšanai ir vairāki būtiski trūkumi:

1. Nav iespējams apstiprināt HIV 1 p24 antigēna noteikšanu, ja tiek izmantoti testi, kas vienlaikus nosaka antigēnu un antivielas pret HIV, kas padara par nepiemērotu (bezjēdzīgu) izmantot skrīninga testus vienlaicīgai antigēna un antivielu noteikšanai. uz HIV (Krievijas Federācijas Veselības ministrijas rīkojums Nr. 292, datēts ar 30.07.2001.: "lai izmeklētu donorus asins pārliešanas stacijās, nepieciešams izmantot testu sistēmas, kas nosaka gan antigēnu, gan antivielas pret HIV").

2. Tikai IgG klases antivielu noteikšana. Nav iespējams pilnībā apstiprināt pozitīvos rezultātus, kas iegūti, izmantojot 3. un 4. paaudzes testus (nosakot IgG un IgM antivielas).

3. Pārbaudes rezultāta interpretācijas subjektivitāte, īpaši "šaubīgu" un "nenoteiktu" rezultātu gadījumos un sākuma posmi serokonversija (šajos gadījumos nosakāmās joslas uz nitrocelulozes membrānām ir izplūdušas, tikko redzamas ar neapbruņotu aci un novērtējot dažādas personas bieži rodas domstarpības).

4. Analīzes rezultātu automatizētas kvantitatīvās novērtēšanas neiespējamība.

5. Zemāka jutība salīdzinājumā ar ELISA.

6. Uzglabāšanas trauslums (uzglabāšanas laikā nitrocelulozes membrānas sloksnes izbalo un nevar būt objektīvs apstiprinājums HIV konstatēšanai vai neatklāšanai strīdīgos gadījumos).

7. Grūtības izveidot reakciju un uzglabāšanu (nitrocelulozes membrānas sloksnes ir ļoti trauslas un bieži saplīst).

8. Augstas IS komplektu izmaksas.

Zināms reaģents, kas ir komplekts antigēnu un antivielu vienlaicīgai noteikšanai pret vienu un to pašu patogēnu, tostarp HIV (DE 4236189 F1, 28.04.1994.). Tomēr netiek izpausta testu sistēma, kas ļauj diagnosticēt HIV infekciju dažādos posmos.

Šī izgudrojuma mērķis ir iegūt testu sistēmu, ar kuras palīdzību ir iespējams apstiprināt pozitīvus vai apšaubāmus skrīninga testu rezultātus pret HIV 1 un 2, HIV 1 O grupas un HIV 1 p24 antigēnu antivielām, izmantojot testus, lai vienlaicīgi noteiktu antigēni un antivielas.

Piedāvātais tehniskais risinājums tiek panākts ar enzīmu imūnanalīzes testa sistēmu, lai identificētu antivielu spektru pret cilvēka imūndeficīta vīrusu (HIV) pirmā un otrā tipa, pirmā tipa O grupas un p24 antigēna noteikšanai pret cilvēka imūndeficīta vīrusu. pirmā tipa p24, kas raksturīgs ar to, ka satur imūnsorbentu, kura pamatā ir cilvēka imūndeficīta vīrusa antigēni, kas ir gp41 (env HIV-1 un HIV-2 grupa O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol) , gp36 (env HIV-2), antivielas pret HIV antigēnu 1 p24 un noteikšanas reaģentus, kur iepriekš minētie HIV antigēni un HIV antivielas tiek adsorbēti dažādās plāksnīšu iedobēs fermentu imūntestam.

Turklāt sorbcijai izmanto 96 bedrīšu polistirola saliekamās vai nesaliekamās plāksnes fermentu imūntestam.

Ar šo izgudrojumu sasniegtais tehniskais rezultāts ir iespēja apstiprināt pozitīvus rezultātus antivielām pret HIV 1 un 2, HIV 1 O grupas un HIV 1 p24 antigēnu, augsta jutība, iespēja automatizēti interpretēt rezultātus, kas novērš HIV subjektivitāti. novērtējums, testa veikšanas vieglums, mazāk nekā ar esošajām izmaksu IS komplektiem.

Šis tehniskais risinājums atšķiras no zināmajiem:

1. Izmantot kā cietās fāzes nesējplāksni imunoloģiskām reakcijām.

2. Antivielu pret p 24 HIV un HIV antigēnu komplekta vienlaicīga izmantošana kā sorbents.

Izgudrojumu ilustrē šāds piemērs.

Izstrādātās testu sistēmas "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1" aktīvās darbības princips ir:

Imunosorbents - HIV-1 strukturālajiem proteīniem līdzīgi rekombinantie antigēni: gp41 (env HIV-1 un HIV 1 grupa O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) un monoklonālie peles antivielas pret HIV 1(p24) antigēnu, kas atsevišķi adsorbētas uz saliekamās polistirola plāksnes sloksnēm.

Imūnsorbenta sagatavošanai lietošanai:

1. HIV-1 gp41 ir proteīns, ko ražo E. Coli celms Nr. AHIV 103.

2. HIV-1 gp120 ir proteīns, ko ražo E. Coli celms Nr. AHIV 109.

3. HIV-1 p24 - proteīns, ko ražo E. Coli celms Nr. AHIV 105.

4. HIV-1 p31 - proteīns, ko ražo E. Coli celms Nr. AHIV 108.

5. HIV-2 p36 - proteīns, ko ražo E. Coli celms Nr. AHIV 106.

Konjugāts 1, liofilizēts vai šķidrs, peles monoklonālās antivielas pret HIV1 p24 antigēnu, konjugētas ar biotīnu.

1. Konjugāts 2, liofilizēts vai šķidrs, rekombinanto antigēnu maisījums, kas līdzīgs HIV-1 strukturālajiem proteīniem: gp41 (env HIV-1 un HIV 1 grupa O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (po1 ); HIV-2: gp36 (env) konjugēts ar biotīnu;

2. Konjugāti 3, 4 - liofilizēts vai šķidrs - streptavidīns, kas iezīmēts ar mārrutku peroksidāzi;

Iepriekšējo pētījumu gaitā tika izvēlēts testēšanas sistēmas dizains, izstrādāta tās komponentu sagatavošanas tehnoloģija un optimizēti fermentu imūnanalīzes veikšanas nosacījumi.

Iestatot ELISA testu sistēmā "DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1", plāksnes iedobēm ar adsorbētām antivielām pret p24 pievieno 25 μl konjugāta-1. iedobes ar adsorbētiem antigēniem - 25 µl konjugāta-2. Reakcijas shēma ir parādīta zemāk. Pēc tam katrā iedobē pievieno 25 μl testa parauga. Tajā pašā laikā iedobēs ar antigēniem krāsa mainās no oranžas uz rozā, bet iedobē ar antivielām - no zaļas uz pelēku. Maisījumu 45 minūtes inkubē 37°C temperatūrā kratītājā (vai 1 stundu 37°C termostatā). Pēc tam bez mazgāšanas tabletes iedobēm pievieno 50 μl konjugāta-3 p24 antigēna noteikšanai, bet antivielu noteikšanas iedobēm pievieno 50 μl konjugāta-4. Pēc 20 minūšu inkubācijas 37°C kratītājā (vai 30 min 37°C termostatā) plāksni mazgā un attīsta ar substrāta maisījumu. Kopējais reakcijas laiks 1 stunda 25 minūtes (vai 1 stunda 50 minūtes). Testa paraugā esošais p24 antigēns saistās ar monoklonālajām antivielām pret p24, un specifiskās antivielas veido kompleksu ar rekombinantiem antigēniem uz plāksnes. Iegūtais imūnkomplekss anti-p24 ar p24 tiek noteikts ar anti-p24-biotīna konjugātiem, pēc tam ar streptavidīna peroksidāzi, un Ag-HIV imūnkompleksus ar At-HIV nosaka ar Ag-biotīna konjugātu, pēc tam ar streptavidīna peroksidāzi. .

Reakcijas iestatīšanas shēma.

Rezultātu uzskaite tiek veikta spektrofotometriski pie diviem viļņu garumiem: 450 /620-680 nm ar instrumentu, kas iestatīts uz "gaiss". Ņemsim vērā rezultātus pie viena viļņa garuma 450 nm.

Analīzes rezultāti tiek ņemti vērā, ja optiskā blīvuma (OD) vidējās vērtības iedobēs ar K- nav lielākas par 0,2, iedobēs ar K+ - ne mazākas par 1,0. OP krit. aprēķina pēc formulas:

OP krit. gp41 = sk. vērtību OP K-(gp41)+0,15

OP krit. gp120 = sk. vērtību OP K-(gp120)+0,15

OP krit. p24 = sk. vērtību OP K-(р24)+0,15

OP krit. p31 = sk. vērtību OP K-(31)+0,15

OP krit. gp36 = sk. vērtību OP K-(gp36)+0,15

OP krit. Ag p24 = sk. vērtību OD līdz- (Ag p24)+0,04

kur 0,15 un 0,04 ir koeficienti, kas noteikti ar ražotāja statistiskās apstrādes metodi. Testēšanas sistēmas izstrādes procesā tika izmantots:

1. Asins seruma paraugi no veseliem donoriem (n=610).

2. Asins seruma paraugi no pacientiem ar dažādām infekcijas slimības nav saistīta ar HIV (ARI, pneimonija, tonsilīts, herpetiskas un citomegalovīrusa infekcijas, sifiliss, hlamīdijas, vīrusu hepatīts A, B un C (n=224)).

3. Asins seruma paraugi pacientiem ar dažādām neinfekcijas slimībām - traumām, sirds un asinsvadu sistēmas slimībām, onkoloģiju (n=35).

4. Grūtnieču asins seruma paraugi (n=40).

5. Asins seruma paraugi, seropozitīvi ELISA un apstiprināti imūnblotā (n=428).

6. Seruma paraugi ar pozitīvu rezultātu, kas iegūts enzīmu imūnanalīzes testu sistēmās HIV 1,2 antivielu un p24 antigēna vienlaicīgai noteikšanai, un nenoteiktu imūnblota rezultātu (n=123).

7. Seruma iekšējais panelis, kas satur un nesatur antivielas pret HIV 1.2, pārbaudīts ar Krievijas Federācijas Veselības ministrijas reģistrētiem enzīmu imūntestiem un imūnblotu (n=21).

8. Standarts "HIV 1 ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", Francija, kat. 72217, kas ir antigēns, kas iegūts no vīrusa lizāta.

9. Uzņēmuma iekšējais standarts. Paraugs, kas satur p 24 antigēnu koncentrācijā 200 pg/ml, kas iegūts no vīrusa lizāta un titrēts pēc "HIV 1 ANTIGĒNA STANDARTS" firmas "BIO RAD", Francija, kat. Nr.72217.

10. Standarta serumu panelis, kas satur antivielas pret pirmā tipa cilvēka imūndeficīta vīrusu (HIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P, Medico-Biological Union, Novosibirska.

11. Standarta panelis serumu, kas satur antivielas pret cilvēka imūndeficīta vīrusu otrā tipa (HIV 2) - OSO-42-28-216-02P, Medico-Biological Union, Novosibirska.

12. Standarta serumu panelis, kas nesatur antivielas pret pirmā un otrā tipa cilvēka imūndeficīta vīrusu (HIV 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, Medico-Biological Union, Novosibirska.

Testa sistēmas jutīguma novērtējums p24 antigēna noteikšanai tika veikts, izmantojot uzņēmuma iekšējo standartu "HIV I ANTIGĒNA STANDARTS", "BIO RAD". Izmantojot iekšējo standartu, tika sagatavoti 4 secīgi 2-kārtīgi atšķaidījumi no 40 pg/mL līdz 5 pg/mL ar normālu donora plazmu bez antivielām pret HIV 1, 2 kā šķīdinātāju. Par jutīguma kritēriju tika ņemts mazākais nosakāmā antigēna daudzums. Iegūtie dati ir parādīti 1. tabulā.

Lai novērtētu testa sistēmas jutīgumu specifisku antivielu noteikšanai, tika izmantoti standarta paraugu paneļi, kas satur cilvēka imūndeficīta vīrusa (HIV 1, 2) antivielas (OSO 42-28-212-93-02P p.012, OSO 42-28-216- 02P (HIV 2) 003. lpp.).

Iegūtie dati atspoguļoti 3., 4. tabulā.

Testu sistēmas "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" diagnostiskā efektivitāte tika salīdzināta ar testu sistēmām "Jenscrin-HIV-Ag/Am" (Bio-Rad), "DIA-HIV 1 /2" (Diaprof-Med), "Vironostics of HIV Uniform II Ag/Am" (Biomerioux), "Recombinant-HIV1.2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1.2 K" (Amercard) , " HIV-1, HIV-2-ELISA-Avicenna" (Avicenna). Šim nolūkam seruma paraugi no iekšējā paneļa tika pārbaudīti visos norādītajos testos. 5. tabulā sniegtie rezultāti norāda uz "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" augsto diagnostisko efektivitāti.

Tika veikti arī testu sistēmas "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" jutīguma pētījumi ar pacientu asins serumiem, kuri imūnblotā apstiprināti kā HIV pozitīvi. Kopumā tika pārbaudīti 428 šo serumu paraugi. Ir iegūtas vairākas iespējas antivielu noteikšanai pret dažādiem HIV proteīniem un p24 antigēnu. Rezultāti ir parādīti 6. tabulā.

Pārbaudot HIV 1 pozitīvos paraugus, 3% serumu uzrādīja pozitīvu reakciju ar gp36 (env HIV 2). MP/OPcrit šajos paraugos nepārsniedza 2,0. Mūsu dati par HIV 1 (gp41) un HIV 2 (gp36) ārējā apvalka proteīnu krustenisko reaktivitāti atbilst literatūras datiem.

Rezultātu interpretācija

HIV pozitīvo serumu un paraugu no standarta un iekšējiem paneļiem testēšanas analīze "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" ļāva izstrādāt kritērijus šī testa rezultātu interpretācijai. Ieteicamie kritēriji ir parādīti 7. tabulā.

Pamatojoties uz šiem kritērijiem, visi HIV pozitīvie seruma paraugi (n=428) tika identificēti kā pozitīvi "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1". No 16 standarta paneļa paraugiem, kas satur antivielas pret HIV 1, 14 tika noteikti kā pozitīvi un 2 kā nenoteikti. Visi 8 paraugi no standarta paneļa, kas satur antivielas pret HIV 2, tika noteikti kā pozitīvi. No 10 paraugiem no iekšējā paneļa, kas satur antivielas pret HIV, 1 tika identificēti kā pozitīvi un 3 kā nenoteikti.

Tika veikti arī testu sistēmas "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" jutīguma pētījumi ar pacientu asins serumiem ar pozitīvu rezultātu enzīmu imūntestu sistēmās, kas vienlaikus nosaka antivielas un p24 antigēnu. , un imūnblotā nenoteikts. Kopumā tika pārbaudīti 123 šādi paraugi. Dati ir parādīti 8. tabulā.

Pārbaudot serumus ar nenoteiktu imūnblota rezultātu (n=123) "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1", 72 paraugi (58,5%) uzrādīja pozitīvu rezultātu. No tiem 26 serumi (21,1%) ir pozitīvi tikai uz p24, 20 (16,3%) - tikai uz antivielām, 16 (13%) - uz p24 ar antivielām pret kādu no proteīniem, 10 (8,1%) - uz p24 ar antivielas pret diviem vai vairākiem proteīniem. Tādējādi, pārbaudot tikai antivielas (nav noteikta p24), 30 paraugi (24,4%) būtu pozitīvi. P24 antigēna noteikšana testā ļāva noteikt kā pozitīvus papildu 42 paraugus (34,1%).

Lai novērtētu testa sistēmas specifiku, tika izmantots standarta serumu panelis, kas nesatur antivielas pret HIV 1, 2 (n=20); asins seruma paraugi no veseliem donoriem (n=610), asins seruma paraugi no pacientiem ar dažādām ar HIV nesaistītām infekcijas slimībām (n=224); asins seruma paraugi pacientiem ar dažādām neinfekcijas slimībām - traumām, sirds un asinsvadu sistēmas slimībām, onkoloģiju (n=35); grūtnieču asins seruma paraugi (n=40). Kopumā tika pārbaudīti 929 paraugi. Viens veselu donoru asins seruma paraugs uzrādīja viltus pozitīvu rezultātu – tika konstatētas antivielas pret gp41 un p24. 7 asins serumu paraugi no veseliem donoriem un 2 asins serumu paraugi no pacientiem ar infekcijas slimībām, kas nav saistītas ar HIV, uzrādīja kļūdaini pozitīvu rezultātu p24.

Lai novērtētu testa sistēmas specifiku, tika izmantots standarta negatīvo paraugu panelis (OSO 42-28-214-94-02p, 009. lpp.). Specifiskums bija 100%.

Tādējādi pētījumos ir pierādīts, ka testu sistēmas "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" specifika ir 99% normālu donoru un pacientu ar dažādām infekciozām un. somatiskās slimības.

Iegūtie dati liecina par izstrādātās testu sistēmas "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" augsto diagnostisko efektivitāti. Testa sistēmu var izmantot, lai noteiktu antivielas pret atsevišķiem HIV 1. un 2. tipa proteīniem un HIV1 p24 antigēnu, lai apstiprinātu pozitīvu skrīninga rezultātu ar testu sistēmām, kas nosaka antivielas, vai testa sistēmām, kas vienlaikus nosaka antivielas un HIV1 p24 antigēnu. Testa sistēmu var izmantot kā alternatīvu imūnblota testu, lai apstiprinātu pozitīvus rezultātus, kā arī pētītu antivielu dinamiku pret HIV un p24 antigēnu dažādās infekcijas stadijās.

PĀRBAUDES PRIEKŠROCĪBAS

1. Apstiprinājuma enzīmu imūntesta plāksnes formāts

2. Apstiprinošs tests, kas apvieno HIV 1, 2 antivielu spektru un HIV 1 p24 antigēnu

3. Visu Ig klašu antivielu noteikšana

4. Jutība p24 noteikšanai nav mazāka par 5 pg/ml

5. Samazina nenoteiktus rezultātus salīdzinājumā ar imūnblotu

6. Analīzes laiks - 1 stunda 25 minūtes (imūnblots - no 3 līdz 20 stundām)

7. Visu sastāvdaļu un paraugu ieviešanas vizuālais novērtējums.

1. ELISA testu sistēma pirmā un otrā tipa cilvēka imūndeficīta vīrusa (HIV) antivielu spektra identificēšanai, pirmā tipa O grupas un p24 antigēna noteikšanai pret cilvēka imūndeficīta vīrusa pirmo tipu p24, kas raksturīgs ar to, ka satur imūndeficīta vīrusa antigēnus gp41 (env HIV-1 un HIV-2 grupa O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), antivielas. HIV antigēnam 1 p24 un noteikšanas reaģentiem, savukārt iepriekš minētie HIV antigēni un HIV antivielas tiek adsorbēti dažādās plākšņu iedobēs enzīmu imūnanalīzei.

2. ELISA testa sistēma saskaņā ar 1. punktu, kas raksturīga ar to, ka sorbcijai tiek izmantotas 96 iedobju polistirola saliekamas vai nesaliekamas plāksnes fermentu imūnanalīzei.

Savlaicīga HIV infekcijas diagnostika kļūst par ārkārtīgi svarīgu pasākumu, jo agrāka ārstēšana lielā mērā var noteikt slimības tālāko attīstību un paildzināt pacienta dzīvi. Pēdējos gados ir panākts būtisks progress šīs briesmīgās slimības noteikšanas jomā: vecās pārbaudes sistēmas tiek aizstātas ar modernākām, izmeklēšanas metodes kļūst pieejamākas, un to precizitāte ievērojami palielinās.

Šajā rakstā mēs runāsim par mūsdienīgām HIV infekcijas diagnostikas metodēm, kuras ir noderīgi zināt savlaicīga ārstēšana novērst šo problēmu un uzturēt normālu slimā dzīves kvalitāti.

HIV diagnostikas metodes

Krievijā HIV infekcijas diagnosticēšanai standarta procedūra kas ietver divus līmeņus:

• ELISA testu sistēma (skrīninga analīze);
• imūnblotēšana (IB).

Var izmantot arī citas diagnostikas metodes:

• eksprestesti.

ELISA testu sistēmas

Diagnozes pirmajā posmā HIV infekcijas noteikšanai izmanto skrīninga testu (ELISA), kura pamatā ir HIV proteīni, kas izveidoti laboratorijās, kas uztver specifiskas antivielas, kas organismā veidojas, reaģējot uz infekciju. Pēc to mijiedarbības ar testa sistēmas reaģentiem (enzīmiem) mainās indikatora krāsa. Turklāt šīs krāsu izmaiņas tiek apstrādātas ar speciālu aprīkojumu, kas nosaka veiktās analīzes rezultātu.

Šādi ELISA testi spēj uzrādīt rezultātus dažu nedēļu laikā pēc HIV infekcijas ievadīšanas. Šī analīze nenosaka vīrusa klātbūtni, bet nosaka antivielu veidošanos pret to. Dažreiz cilvēka organismā antivielu veidošanās pret HIV sākas pēc 2 nedēļām pēc inficēšanās, bet lielākajai daļai cilvēku tās tiek ražotas vēlāk, pēc 3-6 nedēļām.

Ir četras ELISA testu paaudzes ar dažādu jutību. Pēdējos gados arvien biežāk tiek izmantotas III un IV paaudzes testu sistēmas, kuru pamatā ir sintētiskie peptīdi vai rekombinantie proteīni un kurām ir lielāka specifika un precizitāte. Tos var izmantot, lai diagnosticētu HIV infekciju, uzraudzītu HIV izplatību un nodrošinātu drošību, pārbaudot ziedotās asinis. III un IV paaudzes ELISA testu sistēmu precizitāte ir 93-99% (valstīs tiek ražoti jutīgāki testi Rietumeiropa – 99%).

Lai veiktu ELISA testu, no pacienta vēnas ņem 5 ml asiņu. Starp pēdējo ēdienreizi un analīzi jābūt vismaz 8 stundām (parasti to veic no rīta tukšā dūšā). Šādu testu ieteicams veikt ne agrāk kā 3 nedēļas pēc iespējamās inficēšanās (piemēram, pēc neaizsargāta dzimumakta ar jaunu dzimumpartneri).

ELISA testa rezultāti tiek iegūti pēc 2-10 dienām:

• negatīvs rezultāts: norāda uz HIV infekcijas neesamību un neprasa nosūtījumu pie speciālista;
• viltus negatīvs rezultāts: var novērot agri datumi infekcija (līdz 3 nedēļām), AIDS vēlīnās stadijās ar smagu imūnsupresiju un nepareizu asins sagatavošanu;
• viltus pozitīvs rezultāts: to var novērot dažu slimību un nepareizas asins sagatavošanas gadījumā;
• pozitīvs rezultāts: norāda uz infekciju HIV infekcija, nepieciešams IB un pacienta nosūtījums pie AIDS centra speciālista.

Kāpēc ELISA tests var dot viltus pozitīvus rezultātus?

Kļūdaini pozitīvus HIV ELISA testa rezultātus var novērot nepareizas asins apstrādes gadījumā vai pacientiem ar šādiem stāvokļiem un slimībām:

• multiplā mieloma;
• infekcijas slimības, ko izraisa Epšteina-Barra vīruss;
• stāvoklis pēc ;
• autoimūnas slimības;
• uz grūtniecības fona;
• stāvoklis pēc vakcinācijas.

Iepriekš aprakstīto iemeslu dēļ asinīs var būt nespecifiskas krusteniski reaģējošas antivielas, kuru veidošanos nav izraisījusi HIV infekcija.

Pēdējos gados viltus pozitīvu rezultātu biežums ir ievērojami samazinājies, jo tiek izmantotas III un IV paaudzes testu sistēmas, kas satur jutīgākus peptīdu un rekombinantos proteīnus (tie tiek sintezēti, izmantojot in vitro gēnu inženieriju). Pēc šādu ELISA testu izmantošanas viltus pozitīvu rezultātu biežums ir ievērojami samazinājies un ir aptuveni 0,02-0,5%.

Viltus pozitīvs rezultāts nenozīmē, ka cilvēks ir inficēts ar HIV. Šādos gadījumos PVO iesaka citu ELISA testu (obligātā IV paaudze).

Pacienta asinis tiek nosūtītas uz atsauces vai arbitrāžas laboratoriju ar atzīmi "atkārtot" un pārbaudītas IV paaudzes ELISA testu sistēmā. Ja jaunās analīzes rezultāts ir negatīvs, pirmais rezultāts tiek atzīts par kļūdainu (viltus pozitīvu) un IB netiek veikts. Ja otrā testa rezultāts ir pozitīvs vai apšaubāms, pacientam 4–6 nedēļu laikā jāveic IB, lai apstiprinātu vai atspēkotu HIV infekciju.

imūnblotēšana

Galīgo HIV infekcijas diagnozi var veikt tikai pēc pozitīva imūnblotēšanas (IB) rezultāta iegūšanas. Tās īstenošanai tiek izmantota nitrocelulozes sloksne, uz kuras tiek uzklāti vīrusu proteīni.

Asins paraugu ņemšana IB tiek veikta no vēnas. Pēc tam tiek veikta īpaša apstrāde un tā serumā esošās olbaltumvielas tiek atdalītas īpašā želejā atbilstoši to lādiņam un molekulmasai (manipulācija tiek veikta uz speciāla aprīkojuma elektriskā lauka ietekmē). Uz asins seruma gēla tiek uzklāta nitrocelulozes sloksne un speciālā kamerā tiek veikta blotēšana (“blotēšana”). Sloksne tiek apstrādāta un, ja izmantotie materiāli satur antivielas pret HIV, tad tās saistās ar antigēnu joslām uz IB un parādās kā līnijas.

IB tiek uzskatīts par pozitīvu, ja:

• saskaņā ar Amerikas CDC kritērijiem - uz sloksnes ir divas vai trīs līnijas gp41, p24, gp120 / gp160;
• saskaņā ar Amerikas FDA kritērijiem - uz lentes ir divas līnijas p24, p31 un līnija gp41 vai gp120 / gp160.

99,9% gadījumu pozitīvs IB rezultāts norāda uz HIV infekciju.

Ja nav līniju - IB ir negatīvs.

Identificējot līnijas ar gp160, gp120 un gp41, IB ir apšaubāma. Šādu rezultātu var noteikt, ja:

• onkoloģiskās slimības;
• grūtniecība;
• biežas asins pārliešanas.

Šādos gadījumos ir ieteicams veikt otru pētījumu, izmantojot cita uzņēmuma komplektu. Ja pēc papildu IB rezultāts paliek apšaubāms, tad novērošana ir nepieciešama sešus mēnešus (IB tiek veikta ik pēc 3 mēnešiem).

polimerāzes ķēdes reakcija

PCR tests var noteikt vīrusa RNS. Tā jutība ir diezgan augsta un ļauj atklāt HIV infekciju jau 10 dienas pēc inficēšanās. Dažos gadījumos PCR var dot viltus pozitīvus rezultātus, jo tā augstā jutība var reaģēt arī uz antivielām pret citām infekcijām.

Šī diagnostikas tehnika ir dārga, tai nepieciešama īpaša iekārta un augsti kvalificēti speciālisti. Šie iemesli neļauj to veikt iedzīvotāju masveida pārbaudēs.

PCR izmanto šādos gadījumos:

• atklāt HIV jaundzimušajiem, kuri dzimuši HIV inficētām mātēm;
• atklāt HIV "logu periodā" vai apšaubāmas IB gadījumā;
• kontrolēt HIV koncentrāciju asinīs;
• donoru asiņu izpētei.

Tikai ar PCR testu HIV diagnoze netiek noteikta, bet tiek veikta kā papildu diagnostikas metode strīdu risināšanai.

Ekspress metodes

Par vienu no jauninājumiem HIV diagnostikā kļuvuši eksprestesti, kuru rezultātus var novērtēt 10-15 minūtēs. Visefektīvākos un precīzākos rezultātus iegūst ar imūnhromatogrāfiskiem testiem, kuru pamatā ir kapilārās plūsmas princips. Tās ir īpašas sloksnes, uz kurām tiek uzklātas asinis vai citi testa šķidrumi (siekalas, urīns). Ja ir antivielas pret HIV, pēc 10-15 minūtēm uz testa parādās krāsaina un kontroles josla - pozitīvs rezultāts. Ja rezultāts ir negatīvs, parādās tikai kontroles līnija.

Tāpat kā ar ELISA testiem, ātrā testa rezultāti jāapstiprina ar IB analīzi. Tikai pēc tam var noteikt HIV infekcijas diagnozi.

Ir pieejami ekspreskomplekti testēšanai mājās. OraSure Technologies1 (ASV) tests ir FDA apstiprināts, pieejams bez receptes, un to var izmantot HIV noteikšanai. Pēc testa pozitīva rezultāta gadījumā pacientam ieteicams iziet pārbaudi specializētā centrā, lai apstiprinātu diagnozi.

Pārējos mājas lietošanai paredzētos testus FDA vēl nav apstiprinājusi, un to rezultāti var būt ļoti apšaubāmi.

Neskatoties uz to, ka ātrās pārbaudes precizitāte ir zemāka par IV paaudzes ELISA testiem, tos plaši izmanto iedzīvotāju papildu testēšanai.

Pārbaudīties uz HIV infekciju var jebkurā poliklīnikā, Centrālajā reģionālajā slimnīcā vai specializētajos AIDS centros. Krievijas teritorijā tie tiek turēti absolūti konfidenciāli vai anonīmi. Katrs pacients var sagaidīt medicīnisku vai psiholoģisku padomu pirms vai pēc analīzes. Par HIV testiem būs jāmaksā tikai komercārstniecības iestādēs, valsts klīnikās un slimnīcās tos veic bez maksas.

Lasiet par veidiem, kā jūs varat inficēties ar HIV un kādi mīti pastāv par iespējām inficēties.